貨號(hào)：L6020L

品名：T7 DNA Ligase（T7 DNA連接酶）

產(chǎn)品描述：

T7 DNA連接酶催化雙鏈DNA中5'磷酸和3'羥基末端之間形成磷酸二酯鍵。該酶將加入平端和粘性末端以及修復(fù)雙鏈DNA中的單鏈缺口。

蛋白質(zhì)來源

攜帶T7 DNA連接酶基因的重組大腸桿菌菌株。

提供：

20mM Tris-HCl 
50mM NaCl 
1mM DTT 
0.1mM EDTA 
50％甘油
pH 7.5在25℃

隨附：

B1010 (2X Rapid Ligation Buffer)

2X Rapid Ligation Buffer (B1010):
132mM Tris-HCI
20 mM MgCl2
2 mM DTT
2 mM ATP
15% PEG 6000
pH 7.6 @ 25°C

單位定義 
1單位定義為在23℃30分鐘內(nèi)連接50ng 100ng DNA的片段與粘性末端所需的T7 DNA連接酶的量。

質(zhì)量控制分析

單位表征測定
單位活性使用2倍系列稀釋法測量。在1X快速連接緩沖液中進(jìn)行酶稀釋，并加入到20μL含有雙鏈DNA的片段和1X快速連接緩沖液的反應(yīng)中。將反應(yīng)在?23℃（室溫）孵育30分鐘，在冰上沉降，并在用溴化乙錠染色的1％瓊脂糖凝膠上分析。

蛋白質(zhì)濃度（OD 280）測量使用使用2.0mg / ml BSA樣品（Pierce Cat＃23209）標(biāo)準(zhǔn)化的Nanodrop ND-1000分光光度計(jì)
在OD 280處分析2.0μL酶樣品并用產(chǎn)品儲(chǔ)存溶液沖切。觀察到的3個(gè)重復(fù)樣品的平均測量值使用67,850的消光系數(shù)和41,132道爾頓的分子量轉(zhuǎn)換為mg / mL。

SDS-Page（物理純度評(píng)估）

將2.0μL濃縮的酶溶液加載到變性的4-20％Tris-甘氨酸SDS-PAGE凝膠上，該凝膠側(cè)翼為寬范圍的MW標(biāo)記和2.0μL的樣品的1:100稀釋物。電泳后，將凝膠染色并比較??樣品以確定物理純度。該測試的驗(yàn)收標(biāo)準(zhǔn)要求濃縮樣品中污染帶的總量不超過稀釋樣品中目的蛋白質(zhì)條帶的質(zhì)量，確認(rèn)濃縮樣品的純度大于99％。

污染測試

單鏈核酸外切酶活性
將含有10,000cpm放射性標(biāo)記的單鏈DNA底物和10μL酶溶液的50μL反應(yīng)物在37℃下溫育4小時(shí)，導(dǎo)致TCA可溶性計(jì)數(shù)的釋放小于1.0％。

雙鏈外切核酸酶活性將含有5,000cpm放射性標(biāo)記的雙鏈DNA底物和10μL酶溶液的50μL反應(yīng)物在37℃下溫育4小時(shí)，導(dǎo)致TCA可溶性計(jì)數(shù)的釋放小于1.0％。

雙鏈核酸內(nèi)切酶活性將含有0.5μgpBR322 DNA和10μL酶溶液的50μL反應(yīng)物在37℃下溫育4小時(shí)，結(jié)果通過瓊脂糖凝膠電泳確定沒有肉眼可察覺地轉(zhuǎn)化為帶切口的環(huán)狀DNA。

大腸桿菌  16S rDNA污染測試
復(fù)制酶溶液的5uL樣品變性，并在TaqMan qPCR測定中篩選污染性大腸桿菌基因組DNA，使用對(duì)應(yīng)于16S rRNA基因座的寡核苷酸引物。測試的驗(yàn)收標(biāo)準(zhǔn)是由3個(gè)重復(fù)的無模板對(duì)照樣品的平均值產(chǎn)生的閾值循環(huán)計(jì)數(shù)（C t）?；跓o模板對(duì)照 Ct  值與標(biāo)準(zhǔn)曲線數(shù)據(jù)之間的相關(guān)性，該測定的檢測限為<10拷貝基因組/樣品。

部分產(chǎn)品信息：

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