Kingfisher生物技術(shù)有限公司致力于加快獸醫(yī)基礎(chǔ)研究，開發(fā)和商業(yè)化了之前市場(chǎng)未曾涉及的多個(gè)物種的研究試劑。我們的主要重點(diǎn)是開發(fā)牛、馬、豬和雞的獸醫(yī)研究用高品質(zhì)試劑，此外，我們也提供包括犬、貓、山羊、綿羊、火雞、水牛、鯰魚、鮭魚等其他動(dòng)物和魚類研究領(lǐng)域用試劑。我們公司位于明尼蘇達(dá)州圣保羅市，我們與大學(xué)和企業(yè)實(shí)驗(yàn)室建立了合作研究中心，位于明尼蘇達(dá)大學(xué)的明尼阿波利斯和圣保羅校區(qū)間，上海普邁生物新近被授權(quán)代理Kingfisher產(chǎn)品，將與Kingfisher公司攜手開拓中國(guó)市場(chǎng)公司必將成為生物技術(shù)領(lǐng)域的*,也將Kingfisher公司的理念貫徹到底，打造生物技術(shù)新概念，Kingfisher主要產(chǎn)品有以下幾個(gè)方面：
    重組蛋白：   干擾素、白介素、巨噬細(xì)胞移動(dòng)抑制因子等
    多克隆抗體： 抗CCL2、抗IL、抗CXCL9等多抗
    ELISA試劑盒：牛CCL2、牛IL-13、犬和馬IL-1 beta、雞IL-16等ELISA 試劑盒

種屬 Species
        Bovine   牛   重組蛋白、多抗、ELISA試劑盒
        Canine   犬   重組蛋白、多抗、ELISA試劑盒
        Chicken  雞  重組蛋白、多抗、ELISA試劑盒
        Equine   馬   重組蛋白、多抗、ELISA試劑盒
        Feline    貓   重組蛋白、多抗、ELISA試劑盒
        Rabbit   兔   重組蛋白、多抗、ELISA試劑盒
        Swine    豬   重組蛋白、多抗、ELISA試劑盒
        Turkey  火雞重組蛋白、多抗、ELISA試劑盒

蛋白質(zhì)常見問題

什么是載體蛋白？

載體蛋白是在重構(gòu)期間添加到凍干的重組蛋白中的另外的蛋白質(zhì)，以在儲(chǔ)存，冷凍和使用期間增加稀釋的重組蛋白的穩(wěn)定性。

什么是重組蛋白重建的可接受的載體蛋白？

牛血清白蛋白（BSA）是用于重組蛋白重建的常見的載體蛋白。但是，如果使用牛重組蛋白，請(qǐng)使用非牛載體蛋白，如馬血清白蛋白（ESA）。 

如果使用重組蛋白進(jìn)行體外細(xì)胞培養(yǎng)刺激，通常可以在含有血清或其他可接受的載體蛋白而不是BSA / ESA溶液的完整細(xì)胞培養(yǎng)基中直接重構(gòu)重組蛋白。

重構(gòu)需要多少濃度的載體蛋白？

在終溶液中載體蛋白的濃度應(yīng)至少為0.1％。如果需要，可以使用另外的載體蛋白。通常，在1X PBS中的0.1-10％BSA溶液是可接受的重構(gòu)溶液。

重組蛋白重建的可接受體積是多少？

通常，對(duì)于我們的5μg和25μg重組蛋白質(zhì)小瓶，100μL是可接受的重建體積。我們的5μg和25μg樣品瓶的大體積為500μL。 

通常，1 mL是我們100μg小瓶重組蛋白的可接受的重建體積。我們的100μg樣品瓶的大體積為2 mL。

重組時(shí)重組蛋白的濃度是多少？

重組蛋白的濃度取決于重建體積。例如，如果在100μL載體蛋白溶液中重構(gòu)5μg重組蛋白，則濃度為5μg/100μL或50μg/ mL。 

重組蛋白的生物活性是什么？

重組蛋白的生物活性列于數(shù)據(jù)表。如果數(shù)據(jù)表中未列出生物活性，我們正在測(cè)試重組蛋白的生物活性。物種特異性生物測(cè)定通常不適用于我們的大多數(shù)蛋白質(zhì)。因此，需要開發(fā)這些生物測(cè)定法。我們選擇在此測(cè)試期間提供重組蛋白。 

重組蛋白的生物活性單位是多少？

我們僅以質(zhì)量單位（即μg）報(bào)告我們的重組蛋白生物活性，而不是以生物活性單位（即單位）。生物活性單位是在特定條件下在特定測(cè)定中產(chǎn)生特定生物活性測(cè)量所需的產(chǎn)物量。生物活性單位依賴于蛋白質(zhì)和化驗(yàn)。另外，通常僅人類重組蛋白質(zhì)具有與生物活性單位相關(guān)的這些特異性生物測(cè)定法。生物活性測(cè)量單位通常沒有明確規(guī)定非人類物種。鑒于生物測(cè)定通常產(chǎn)生高度可變的結(jié)果，生物活性單位的確定也是高度可變的。然而，質(zhì)量不是可變的，因此它提供了更準(zhǔn)確的測(cè)量。從而，

酵母作為表達(dá)系統(tǒng)有什么優(yōu)勢(shì)，它與大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)相比如何？

酵母作為表達(dá)系統(tǒng)具有幾個(gè)優(yōu)點(diǎn)，并且由酵母產(chǎn)生的重組蛋白具有幾個(gè)特征，使得它們成為包括細(xì)胞培養(yǎng)在內(nèi)的許多應(yīng)用的理想選擇。Kingfisher Biotech使用的酵母表達(dá)系統(tǒng)將重組蛋白分泌到培養(yǎng)基中。這種分泌通常被認(rèn)為是純化過程的步，因?yàn)榻湍讣?xì)胞固有地分泌很少的天然蛋白質(zhì)。酵母分泌的重組蛋白質(zhì)通過高爾基體處理，因此它們可以進(jìn)行翻譯后修飾。這些修飾可包括糖基化，磷酸化和硫酸化。有許多蛋白質(zhì)需要修改蛋白質(zhì)功能，正確折疊或溶解度。酵母表達(dá)系統(tǒng)的另一個(gè)好處是酵母沒有像E這樣的細(xì)菌細(xì)胞壁。大腸桿菌，因此不存在內(nèi)毒素（脂多糖）。酵母天然無內(nèi)毒素。

大腸桿菌表達(dá)的重組蛋白不含有翻譯后修飾（大腸桿菌不含高爾基體）。在大腸桿菌中制備的重組蛋白通常定位于包涵體。從這些包涵體中純化可能需要苛刻的條件來釋放重組蛋白，然后進(jìn)行隨后的重折疊過程。這些苛刻的治療可以影響蛋白質(zhì)的功能。

ELISA常見問題解答

你有自己動(dòng)手的ELISAs技術(shù)指南嗎？

是的，我們這樣做。這是鏈接--ELISA技術(shù)指南

使用自己動(dòng)手ELISA可以進(jìn)行多少次檢測(cè)？

自己動(dòng)手的ELISA試劑盒是獨(dú)立的非結(jié)合抗體（捕獲抗體），重組蛋白（標(biāo)準(zhǔn)）和生物素化抗體（檢測(cè)抗體）。如果需要（或組件用完），可以單獨(dú)購買這些組件中的每一個(gè)。已顯示這些抗體與ELISA中提供的標(biāo)準(zhǔn)一起起作用。評(píng)估各個(gè)組件的數(shù)據(jù)表將提供代表性的工作濃度，以幫助確定可以執(zhí)行的分析的數(shù)量。通常，捕獲抗體是限制性試劑。

例如，豬IFNα1自己做的ELISA（DYI0724S-003）包括：
 

100μg抗豬IFNα1多克隆抗體（PB0445S-100）：

ELISA中該試劑的推薦滴度為1-5μg/ ml。如果在96孔板中每孔100μl涂覆，則需要大約10ml試劑涂覆96孔板。因此，根據(jù)使用的滴度，每板需要10μg-50μg。這意味著所提供的試劑應(yīng)涂覆2-10個(gè)板。
 

5μg重組豬IFNα1（RP0010S-005）：

*標(biāo)準(zhǔn)濃度需要由用戶確定。如果使用50 ng / ml（0.05μg/ ml）的高標(biāo)準(zhǔn)濃度，假設(shè)每個(gè)平板需要0.5 ml標(biāo)準(zhǔn)品，這應(yīng)該為200次分析提供足夠的標(biāo)準(zhǔn)。
 

50μgBiotinylatedAnti-SwineIFNα1多克隆抗體（PBB0451??S-050）：

ELISA中該試劑的推薦滴度為0.1-0.5μg/ ml。如果檢測(cè)到 

在96孔板中每孔100μl，這將需要大約10ml試劑來檢測(cè)96孔板。因此，取決于所用的滴度，每個(gè)ELISA需要1-5μg。這意味著所提供的試劑應(yīng)在10-50次檢測(cè)中檢測(cè)。

因此，取決于優(yōu)化結(jié)果，能夠用所提供的組件執(zhí)行的ELISA的數(shù)量可能存在相當(dāng)大的差異。如前所述，這些組件中的每一個(gè)都可以單獨(dú)購買。有可能的是，捕獲抗體需要單獨(dú)購買，因?yàn)樵撛噭⒃谄渌M分（它通常是限制性試劑）之前首先被耗盡。

我們可以在ELISAs中使用其他樣本類型，如血清或血漿嗎？

我們的許多客戶使用我們的ELISAs進(jìn)行血清，血漿或其他樣品類型檢測(cè)。為了使用不同的樣品類型，需要在測(cè)定中驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)品和樣品稀釋劑。*稀釋劑應(yīng)提供線性結(jié)果（即當(dāng)稀釋樣品時(shí)，在校正稀釋因子時(shí)獲得相似的值）并且具有80-120％的回收率（即，如果將已知量的標(biāo)準(zhǔn)物添加到樣品類型中，80-添加的120％應(yīng)在測(cè)定中測(cè)量。

為了驗(yàn)證樣品稀釋劑是否與所需的樣品類型一起工作，需要進(jìn)行線性和回收分析。該測(cè)定法易于實(shí)施。只需使用您的測(cè)試樣品稀釋劑準(zhǔn)備正常的標(biāo)準(zhǔn)曲線。將已知量的標(biāo)準(zhǔn)品加入/加入測(cè)試樣品中。向測(cè)試樣品稀釋劑添加/加入相同數(shù)量的標(biāo)準(zhǔn)品（這是100％回收率）。確保在測(cè)定中運(yùn)行非標(biāo)準(zhǔn)加標(biāo)測(cè)試樣品，以從測(cè)試樣品中減去任何背景值。準(zhǔn)備稀釋劑標(biāo)準(zhǔn)加標(biāo)樣品，測(cè)試標(biāo)準(zhǔn)加標(biāo)樣品和非標(biāo)準(zhǔn)加標(biāo)樣品與測(cè)試稀釋劑（即1：2,1：4,1：8,1：16,1）的多個(gè)連續(xù)稀釋液：32等）。當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)加標(biāo)樣品值（減去非標(biāo)準(zhǔn)加標(biāo)樣品背景）為稀釋劑標(biāo)準(zhǔn)加標(biāo)樣品結(jié)果的80-120％時(shí)，*回收率。此外，當(dāng)校正稀釋（線性）時(shí)，結(jié)果應(yīng)給出類似的值。 

通常，在DPBS（試劑稀釋劑）中用4％BSA進(jìn)行1：4至1：8稀釋足以實(shí)現(xiàn)樣品的線性并獲得*回收率。如果在DPBS中用4％BSA不能獲得*結(jié)果，則需要使用更高的樣品稀釋液或不同的樣品稀釋劑。要嘗試的其他稀釋劑是DPBS中10-50％的血清（例如胎牛血清或馬血清）（只要血清不含可能與ELISA交叉反應(yīng)的目的蛋白質(zhì)）。另外，增加DPBS緩沖液中的BSA含量也可以增加線性和恢復(fù)。

 產(chǎn)品列表如下：

Bovine IL-5 Primer Set