BIOCHECK Inc.是新抗體發(fā)現(xiàn)和免疫測定開發(fā)服務(wù)的綜合提供商。利用我們專有的B細(xì)胞克隆技術(shù),我們可以直接富集陽性B細(xì)胞,分離IgG基因并表達用于各種應(yīng)用的重組抗體。我們還是免疫診斷領(lǐng)域的開發(fā)商和制造商,在將新的IVD產(chǎn)品推向市場方面擁有豐富的經(jīng)驗。除了ELISA之外,我們現(xiàn)在還包括使用Simoa™技術(shù)(單分子陣列)進行超靈敏檢測的分析開發(fā),這是一種檢測低豐度生物標(biāo)記物的強大工具。
PD-L1 ENZYME IMMUNOASSAY TEST KIT Catalog Number: BC-1303
pd-l1酶免疫測定試劑盒目錄編號:bc-1303
酶免疫法定量測定人血清和血漿中Pd-L1的濃度
只作研究用途
不適用于診斷程序
介紹
程序性死亡受體-配體1(pd-l1,b7-h1,cd 274)是b7家族的一種生物標(biāo)志物,在多種細(xì)胞上表達,并在多種促炎細(xì)胞因子(如int)作用下被上調(diào)。 ERFERFON GAMMA 1,2,3。pd-L1與耗盡的T細(xì)胞表達的輔助受體pd-1相互作用,通過減少T細(xì)胞受體介導(dǎo)的增殖,促進免疫抑制性腫瘤微環(huán)境的形成。 N和細(xì)胞因子產(chǎn)生4,5。pd-1/pd-l1相互作用在免疫編輯過程中起著免疫檢查點的作用,宿主免疫系統(tǒng)在此過程中消除了高免疫原性腫瘤。 使較少的免疫原性腫瘤逃避2,6。包括黑色素瘤、腎細(xì)胞癌、非小細(xì)胞肺癌、卵巢癌和結(jié)直腸癌在內(nèi)的多種實體腫瘤類型利用pd-1/pd-L。 1免疫編輯機制。目前的治療主要集中在阻斷PD-1/Pd-L1相互作用,通過抑制Pd-1來減少腫瘤的逃逸,而Pd-L1和1,2則是新的研究重點。
測定原理
pd-L1酶聯(lián)免疫吸附試驗基于固相酶聯(lián)免疫吸附試驗的原理.該檢測系統(tǒng)利用一種*的單克隆抗體對,針對一種*的抗原性測定方法。 Pd-L1分子上的螞蟻。用一種小鼠抗Pd-L1單克隆抗體進行固相固定化(在微滴度井上)。另一種與馬血清結(jié)合的單克隆抗pd-l1抗體 盤過氧化物酶(HRP)存在于酶的共軛溶液中。測試樣本被允許與這兩種抗體順序反應(yīng),導(dǎo)致pd-l1分子被夾在溶膠之間。 ID期和酶解抗體。在室溫下進行兩次單獨的60分鐘孵育后,用洗滌緩沖液沖洗水井,除去未結(jié)合的標(biāo)記抗體。添加TMB試劑 ED在黑暗條件下孵育20分鐘,形成藍(lán)色。隨著停止解決方案的添加,顏色開發(fā)停止,將顏色更改為黃色。 Pd-L1的濃度與樣品的顏色強度成正比。在450 nm處分光度法測定吸光度。
提供的試劑和材料
1.抗體包被井(1板,96井)微滴度井,用小鼠單克隆抗pd-l1包被。
2.20 ng/ml Pd-L1標(biāo)準(zhǔn)品(0.5 mL/小瓶)20 ng/mL Pd-L1在含防腐劑的磷酸鹽緩沖液-BSA溶液中
3.標(biāo)準(zhǔn)稀釋劑和樣品稀釋劑(30 mL/瓶,1瓶)含有含防腐劑的磷酸鹽緩沖液-bsa溶液。
4.酶結(jié)合試劑(12 mL/小瓶,1小瓶)含有與辣根過氧化物酶結(jié)合的小鼠單克隆抗pd-l1。
20倍洗滌劑磷酸鹽緩沖液(50 mL/瓶,1瓶)
TMB試劑(11 mL/瓶,1瓶)含有一步TMB溶液。
7. 停液(11 mL/瓶,1瓶)含有稀釋鹽酸(1NHCl)
貯藏條件
1.將未打開的工具包保存在2-8°C,收到后,當(dāng)它沒有使用,直到到期顯示在工具包標(biāo)簽上。有關(guān)過期日期,請參閱包標(biāo)簽。
2.將微滴度板放在一個裝有干燥劑的密封袋中,以盡量減少對潮濕空氣的暴露。
試劑準(zhǔn)備
1.所有試劑在使用前應(yīng)允許達到室溫(18-25°C)。
2.對于每次測試運行,準(zhǔn)備一個新的標(biāo)準(zhǔn)集。
3.稀釋20 ng/mL標(biāo)準(zhǔn)品至5ng/mL。用標(biāo)準(zhǔn)/樣品稀釋劑制備5納克/mL標(biāo)準(zhǔn)的兩倍系列稀釋劑:
a.5 ng/mL:0.15mL 20 ng/mL標(biāo)準(zhǔn)品/樣品稀釋劑0.45mL
b.2.5納克/毫升:0.25毫升5納克/毫升標(biāo)準(zhǔn)品/樣品稀釋劑
c.1.25納克/毫升:0.25毫升2.5納克/毫升標(biāo)準(zhǔn)品/樣品稀釋劑
d.0.625 ng/mL:1.25ng/mL標(biāo)準(zhǔn)品/樣品稀釋劑0.25mL
e.0.313 ng/mL:0.25mL 0.625 ng/mL標(biāo)準(zhǔn)品/樣品稀釋劑
f.0.156 ng/mL:0.25mL 0.313 ng/mL標(biāo)準(zhǔn)稀釋劑
g.0.078 ng/mL:0.25mL 0.156 ng/mL標(biāo)準(zhǔn)稀釋劑
H.0 ng/mL:0.25 mL標(biāo)準(zhǔn)稀釋劑
5.病人樣本在使用前需要稀釋4倍。制備一系列小管(即1.5 mL微離心管),將60L血清與180 L標(biāo)準(zhǔn)/樣品稀釋劑混合。
6. 工作洗滌緩沖器:從20倍庫存中制備1倍洗滌緩沖液。加入50毫升的20倍洗滌緩沖液庫存到950毫升的直接水。工作洗滌緩沖液在2~8°C溫度下穩(wěn)定運行30天.注:任何晶體 這可能是由于高鹽濃度的存在,必須在室溫下再溶解,然后再進行稀釋。
檢測程序
1.準(zhǔn)備標(biāo)準(zhǔn)。見試劑準(zhǔn)備。
2.稀釋樣品1:4稀釋。見試劑準(zhǔn)備。
3.確保所需數(shù)量的涂層井在保持架。
4.配發(fā)Pd-L1標(biāo)準(zhǔn)的100mL,并將樣品稀釋到適當(dāng)?shù)木?
5.室溫(18-25°C)孵育60 min.
6.將培養(yǎng)皿中的內(nèi)容物倒入廢容器中,將孵化器中的混合物移除。用300mL工作水洗緩沖液沖洗微滴水井5次。把井打在吸水性紙或p上 錐度毛巾,以消除所有殘余水滴。
7.將pd-L1工作酶結(jié)合劑的100mL分配到每口井中.
8.室溫(18-25°C)孵育60 min.
9.將培養(yǎng)皿中的內(nèi)容物倒入廢容器中,將孵化器中的混合物移除。用300 ul工作水洗緩沖液沖洗微滴水井5次。把井打在吸水性紙或p上 錐度毛巾,以消除所有殘余水滴。
10.在每口井中分配100mL TMB溶液。
11.室溫(18-25°C)孵育20分鐘.
12.通過在每口井中加入100mL的停止溶液來停止反應(yīng)。
13.輕輕攪拌30秒。重要的是要確保所有的藍(lán)色*變成黃色。
14. 在450 nm處讀取吸光度,15分鐘內(nèi)使用微滴度良好的閱讀器。
統(tǒng)計
1.計算每組參考標(biāo)準(zhǔn)、對照和樣品的平均吸光度值(OD 450)。
2.通過繪制每個參考標(biāo)準(zhǔn)的平均吸光度(以納克/毫升為單位)繪制在圖表紙上,在垂直(Y)軸上繪制吸光度,并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。 水平(X)軸的接觸。
3.用每個樣品的平均吸光度值,從標(biāo)準(zhǔn)曲線上測定相應(yīng)的Pd-L1濃度(ng/mL)。取決于經(jīng)驗和/或Comput的可用性 可以采用其他的數(shù)據(jù)縮減方法。
4.得到的樣品值應(yīng)乘以稀釋倍數(shù)為4,才能得到Pd-L1的結(jié)果納克/毫升。
標(biāo)準(zhǔn)曲線實例
一個典型的標(biāo)準(zhǔn)運行結(jié)果,吸光度讀數(shù)在450 nm處顯示在Y軸上,而pd-L1濃度顯示在X軸上。注:本標(biāo)準(zhǔn)曲線為圖示目的。 僅用于計算未知數(shù),不應(yīng)用于計算未知數(shù)。每個實驗室必須在每個實驗中生成自己的數(shù)據(jù)和標(biāo)準(zhǔn)曲線。
工作特性
用2SD法測定的Pd-L1酶聯(lián)免疫吸附試驗的低檢出濃度為0.02ng/ml,低檢出濃度為0.02ng/ml。
精度a.在一次測定中,通過對三種不同樣品的重復(fù)測定,確定了內(nèi)測精密度.批內(nèi)可變性如下所示:
b.在一系列單獨校準(zhǔn)的測試中,通過對三個不同樣本的重復(fù)測量,確定了運行間精密度。批間變異顯示b。 below在下面,到下面
- 回收率和線性研究?;厥諛悠芳尤胍阎腜d-L1水平,并一式兩份進行測定。平均回收率為90%。
b. 對三個樣品進行連續(xù)稀釋,以確定線性度。平均回收率為110.3%。
參考
1.赫布斯特,羅伊S.,等人。腫瘤患者對抗PD-L1抗體MPDL3280A的反應(yīng)預(yù)測相關(guān)。“自然”515.7528(2014年):563。
2.帕特爾,桑迪普·普拉文和拉澤爾·庫茲洛克。pd-L1的表達是腫瘤免疫治療中的一個預(yù)測生物標(biāo)志物。分子癌癥治療學(xué)14.4(2015):847-856。
3.書名/作者責(zé)任者:by L.靶向PD-1/B7-H1(PD-L1)通路,激活抗腫瘤免疫。免疫學(xué)新意見24.2(2012年):207-212。
4.布蘭克克里斯汀和安德烈亞斯·馬肯森。PD-L1/PD-1通路對T細(xì)胞衰竭的貢獻:慢性感染和腫瘤逃避的新研究進展。癌癥免疫學(xué) 治療,療法,療效 56.
5(2007):739-745。5.Barber,Daniel L.,等。慢性病毒感染時衰竭CD8 T細(xì)胞的功能恢復(fù)“自然”439.7077(2006年):682。
6.Teng,Michele WL,等。根據(jù)T細(xì)胞浸潤和pd-L1分類癌癥。癌癥研究75.11(2015):2139-2145。
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