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上海起發(fā)大量現(xiàn)貨alstembio VB100說(shuō)明書(shū)

更新時(shí)間:2019-11-15      點(diǎn)擊次數(shù):1580

ALSTEM是一家位于灣區(qū)的早期生物技術(shù)公司,擁有快速擴(kuò)展的產(chǎn)品和服務(wù)組合,為生物制藥和學(xué)術(shù)機(jī)構(gòu)提供服務(wù)。受到加利福尼亞干細(xì)胞研究承諾的啟發(fā),ALSTEM于2012年由具有iPS細(xì)胞重編程和基因組編輯技術(shù)專(zhuān)業(yè)知識(shí)的科學(xué)家創(chuàng)立。

上海起發(fā)大量現(xiàn)貨alstembio VB100說(shuō)明書(shū)

ViralBoost Reagent: #VB100

ViralBoost試劑:#VB100

描述

ViralBoost試劑(500X)是一種新型的小分子混合物,可以增強(qiáng)病毒的產(chǎn)生,并且是有效包裝病毒的強(qiáng)大,廣泛適用的試劑。ViralBoost試劑在轉(zhuǎn)錄水平上穩(wěn)定地調(diào)節(jié)病毒RNA的包裝,可將逆轉(zhuǎn)錄病毒或慢病毒顆粒的產(chǎn)量提高多達(dá)10倍。易于使用的協(xié)議使ViralBoost試劑非常適合各種規(guī)模的病毒包裝。

 

圖1.來(lái)自GFP反轉(zhuǎn)錄病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)的HEK 293T細(xì)胞的流式細(xì)胞儀數(shù)據(jù),GFP反轉(zhuǎn)錄病毒在不存在ViralBoost試劑的情況下包裝。

病毒促進(jìn)病毒生產(chǎn)

 

 

圖2. GFP慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)的HEK 293T細(xì)胞,有和沒(méi)有ViralBoost包裝

ViralBoost病毒產(chǎn)量增加

 

 

產(chǎn)品名稱(chēng)病毒助推器
目錄 #VB100
尺寸1毫升
運(yùn)輸環(huán)境溫度
儲(chǔ)存和穩(wěn)定性儲(chǔ)存在4℃。按說(shuō)明存放該產(chǎn)品可穩(wěn)定12個(gè)月。
質(zhì)量控制使用人類(lèi)胚胎腎293T細(xì)胞在轉(zhuǎn)染測(cè)定中對(duì)每批ViralBoost試劑進(jìn)行了功能測(cè)試。
用法用逆轉(zhuǎn)錄病毒或慢病毒包裝質(zhì)?;旌衔镛D(zhuǎn)染人胚胎腎(HEK)293T細(xì)胞后6-14小時(shí),用新鮮的DMEM培養(yǎng)基代替培養(yǎng)基,該培養(yǎng)基補(bǔ)充有10%熱滅活的胎牛血清和0.5%青霉素-鏈霉素,并添加將1/500體積的ViralBoost試劑加入一體積的新鮮培養(yǎng)基中,并繼續(xù)在37°C的CO2孵育箱中孵育。
限制使用僅供研究使用。不適用于診斷或治療程序。

ViralBoost試劑是一種新型的小分子混合物,可用于高滴度病毒生產(chǎn),并且是有效包裝病毒的強(qiáng)大,廣泛適用的試劑。它在轉(zhuǎn)錄水平上穩(wěn)定地調(diào)節(jié)病毒RNA的包裝,可以極大地提高逆轉(zhuǎn)錄病毒或慢病毒顆粒的產(chǎn)量,多可提高10倍。易于使用的協(xié)議使ViralBoost試劑非常適合各種規(guī)模的病毒包裝。

 

 

使用流程:

一天:轉(zhuǎn)染前一天,

1.用1x明膠涂板/盤(pán)子30分鐘。吸出明膠,并每100 mm平板接種約3-4 X 10 6個(gè) HEK 293T細(xì)胞。每個(gè)板使用10 ml培養(yǎng)基。

注意:擁有良好的單細(xì)胞懸液(胰蛋白酶消化良好)并均勻分布細(xì)胞非常重要。

 

第二天:轉(zhuǎn)染

注意:按照制造商的規(guī)程準(zhǔn)備轉(zhuǎn)染。

2.準(zhǔn)備兩個(gè)試管,然后向每個(gè)試管中加入0.5 ml DMEM。在一個(gè)試管中加入DNA混合物(包含病毒載體和包裝混合物),并通過(guò)輕敲試管將其充分混合。在另一個(gè)管中,添加NanoFect(目錄號(hào)NF100)。通過(guò)互聯(lián)管混合。

注意:在室溫(20–25°C)下孵育不超過(guò)5分鐘。

3.將NanoFect-DMEM混合物轉(zhuǎn)移到DNA管中,上下吸移2-3次。渦旋5-10秒,充分混合。

4.在室溫下孵育約15分鐘,以使NanoFect / DNA復(fù)合物自組裝。

5.滴加NanoFect / DNA混合物到板中,輕輕搖動(dòng)板并將板放回培養(yǎng)箱中

 

第三天:更換培養(yǎng)基并添加ViralBoost

6.用10 ml新鮮培養(yǎng)基代替上清液,并補(bǔ)充20 µl ViralBoost(500X)。將板返回細(xì)胞培養(yǎng)箱。

 

第四天:收集病毒

!注意小心處理病毒材料,避免溢出。使用漂白劑對(duì)危險(xiǎn)液體進(jìn)行消毒(終濃度為10%,持續(xù)30分鐘)。

7.將上清液收集在50 ml錐形管中,并置于冰上。離心機(jī)中以千克上清液10分鐘,以除去細(xì)胞碎片。(將離心機(jī)預(yù)設(shè)為4°C)

8.通過(guò)0.45 µm過(guò)濾器過(guò)濾上清液。將已過(guò)濾的上清液轉(zhuǎn)移至無(wú)菌容器中,并每隔4體積的含病毒上清液添加1體積的冷逆轉(zhuǎn)錄病毒/慢病毒沉淀溶液(4°C,目錄號(hào)VC100和VC200)。(例如:5毫升逆轉(zhuǎn)錄病毒/慢病毒沉淀溶液和20毫升病毒上清液)。

9.充分混合并冷藏過(guò)夜。

 

第五天:濃縮病毒

10.將混合物在4°C下以1500g離心30分鐘。離心后,病毒顆??赡茉谌萜鞯撞砍拭咨虬咨恋?。

11.丟棄上清液。通過(guò)以1500g離心5分鐘來(lái)旋轉(zhuǎn)殘留溶液。抽吸去除所有液體,注意不要擾亂沉淀中沉淀的病毒顆粒。

12.使用冷的無(wú)菌PBS或DMEM在4°C下以原始體積的1/10至1/100重懸病毒沉淀。分裝在低溫小瓶中,并在-80°C下儲(chǔ)存直至準(zhǔn)備使用。

注意:可以使用病毒濃縮/純化程序除去ViralBoost試劑。當(dāng)直接用于轉(zhuǎn)導(dǎo)HEK 293T細(xì)胞時(shí),尚未檢測(cè)到帶有ViralBoost試劑的病毒顆粒粗品對(duì)目的基因表達(dá)的副作用,但不同細(xì)胞系之間可能存在差異。建議事先測(cè)試ViralBoost對(duì)靶細(xì)胞的作用。

 

 

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