haemtech活化蛋白C說明書
活化蛋白C(APC)使因子Va失活
代表了APC對因子Va的蛋白水解失活,其中:PS =蛋白S,PCPS =磷脂囊泡(或細胞表面),Ca ++ =鈣離子。因子Va失活形成因子Vai的原因是APC在三個特定位點對因子Va重鏈(94K)進行了蛋白水解(實心箭頭)(1,2)。這些切割位點在因子Va重鏈中的位置如下:(人:R306,R506和R679)和(牛:R306,R505和R662)。輔因子分子的*滅活需要在精氨酸306位裂解?;罨鞍證在精氨酸306上的切割僅在存在膜的情況下發(fā)生,并且需要事先在精氨酸505上切割重鏈。APC對因子Va輕鏈進行的蛋白水解僅在牛分子中發(fā)生,并且對于滅活不是必需的(虛線箭頭)。
尺寸 | 50微克 |
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公式 | 50%(vol / vol)甘油/ H 2 O |
存儲 | -20°攝氏度 |
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純度 | 通過SDS-PAGE,> 95% |
活性測定 | 顯色測定 |
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保質(zhì)期(正確存放) | 12個月 |
尺寸 | 50微克 |
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公式 | 20 mM Tris,150 mM NaCl,pH 7.4 |
存儲 | -80°攝氏度 |
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純度 | 通過SDS-PAGE,> 95% |
活性測定 | 顯色測定 |
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保質(zhì)期(正確存放) | 12個月 |
尺寸 | 50微克 |
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公式 | 50%(vol / vol)甘油/ H 2 O |
存儲 | -20°攝氏度 |
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純度 | 通過SDS-PAGE,> 95% |
活性測定 | 顯色測定 |
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保質(zhì)期(正確存放) | 12個月 |
尺寸 | 50微克 |
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公式 | 20 mM Hepes,150 mM NaCl,pH 7.4 |
存儲 | -80°攝氏度 |
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純度 | 通過SDS-PAGE,> 95% |
活性測定 | 顯色測定 |
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保質(zhì)期(正確存放) | 12個月 |
活化蛋白C(APC)是一種抗凝血絲氨酸蛋白酶,來源于兩條鏈,依賴于維生素K的酶原,蛋白C(3-7)。α-凝血酶和血栓調(diào)節(jié)蛋白之間的復合物催化蛋白C重鏈中Arg-12(牛中的Arg-14)的單裂,從而產(chǎn)生活化的C蛋白。幾種非生理相關的蛋白酶,例如RVV-X激活劑,胰蛋白酶和PROTAC也能夠激活C蛋白。
APC用作抗凝血劑,可催化輔因子Va和VIIIa因子的蛋白水解失活,從而導致凝血酶原酶和Xase因子復合物的抑制。因子Va和VIIIa的失活都是Ca2 +和磷脂依賴性的。維生素K依賴的輔因子蛋白S通過與APC形成1:1的復合物(Kd = 6x10-9M)適度提高了失活率(8)。
有幾個因素減弱了APC的抗凝活性。Xa因子通過競爭因子Va上相似的結(jié)合位點來保護因子Va免于APC的蛋白水解作用。凝血酶也已被提出通過蛋白S的蛋白水解失活作為APC的調(diào)節(jié)劑。此外,APC還受循環(huán)肝素依賴性蛋白的調(diào)節(jié)C抑制劑(PAI-3),肝素非依賴性循環(huán)蛋白C抑制劑,血小板衍生的蛋白C抑制劑和PAI-1。據(jù)報道,在APC和兩種PAI類型之間形成的復合物可說明在輸注APC或體內(nèi)產(chǎn)生APC時觀察到的纖維蛋白溶解增加。
除了我們的標準APC制劑外,還可以使用含有Dansyl-EGR-氯甲基甲酮的活性位點封閉形式。
活化的蛋白C是由純化的蛋白C通過凝血酶激活,然后進行離子交換色譜法制得的(4)。APC以50%(體積/體積)甘油/水的形式提供,應儲存在-20oC下。通過SDS-PAGE分析確定純度,并使用生色底物測定法測量活性。還按照APC耐藥性分析的要求測試了所有生產(chǎn)批次的APC延長正常人血漿aPTT的能力(10,11)。該測試的結(jié)果以aPTT(+/- APC)比(10nM APC)的形式提供給每個批次。
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