電解槽機(jī)械手ECM 600電穿孔協(xié)議
乳球菌亞種。乳酸菌LM0230
DNA:pGB301
ECM 630電協(xié)議
系統(tǒng): | ECM 630 |
細(xì)胞系): | 乳酸乳球菌LM0230 |
轉(zhuǎn)染子: | 質(zhì)粒,DNA,pGB301 |
引文: | MyIntyre DA和Harlander SK,應(yīng)用與環(huán)境微生物學(xué),55(3):604-610,1989 |
電解槽機(jī)械手ECM 600電穿孔協(xié)議
乳球菌亞種。乳酸菌LM0230
DNA:pGB301
細(xì)胞準(zhǔn)備:
生長培養(yǎng)基:M17 Glu或M17 Lac
溫度:37攝氏度
電池密度:5 x 1010 CFU/ml
溫度:冰鎮(zhèn)
洗滌程序:顆粒5500 x g,4oC,10分鐘
洗滌1:再次洗滌,10毫升無菌冷dd-H2O
顆粒1200 x g至4oC,10分鐘
洗滌2:再次洗滌,10毫升無菌冷dd-H2O
顆粒1200 x g至4oC 15分鐘
洗滌3:再次洗滌,1毫升無菌冷dd-H2O
4oC下顆粒大速度3分鐘
終稀釋:再次使用1.25毫升無菌冷dd-H2O
(等份可在冰上保存不超過兩小時)
電穿孔設(shè)置:
選擇方式:T 2.5kV/電阻高壓(HV)
設(shè)置電容:C高壓時默認(rèn)設(shè)置為50μF
設(shè)置電阻:R5(129歐姆)
腔室間隙:BTX一次性反應(yīng)杯P/N 610(1mm間隙)
BTX扁平封裝室P/N 486(0.56 mm間隙)
設(shè)置充電電壓:S如果使用1毫米,設(shè)置1.70千伏
如果使用0.56毫米,設(shè)置0.95千伏
估計(jì)場強(qiáng):17千伏/厘米
期望脈沖長度:t 5毫秒
電穿孔程序:
樣品體積:70μl
轉(zhuǎn)染體積:0.003-0.94μg
工作溫度:0oC-電穿孔前在冰上冷卻裝滿反應(yīng)杯
脈沖:按A啟動自動充電和脈沖序列
稀釋介質(zhì):M17-葡萄糖肉湯系列稀釋液1:5,1:10,1:100
孵育:30oC,2小時
選擇方法:M17-Glu瓊脂上的抗生素選擇板
結(jié)果:1 x 103
轉(zhuǎn)化子/μg DNA
參考文獻(xiàn):MyIntyre DA and Harlander SK,應(yīng)用與環(huán)境微生物學(xué),55(3):604-610,1989(BTX ID#447)
電話
QQ咨詢
4006551678