sinobiological STF02說(shuō)明書(shū)
中轉(zhuǎn)簡(jiǎn)介
Sinofection是一種基于陽(yáng)離子聚合物的優(yōu)異轉(zhuǎn)染試劑。它已成功應(yīng)用于各種細(xì)胞系的各種規(guī)模的轉(zhuǎn)染。與市場(chǎng)上*的轉(zhuǎn)染試劑相比,Sinfection具有更高的蛋白表達(dá)水平和更低的細(xì)胞毒性。它是用于瞬時(shí)和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的重組蛋白生產(chǎn)的理想選擇。它與血清,細(xì)胞類型,規(guī)模和儲(chǔ)存溫度的廣泛兼容性為您提供了研究和生產(chǎn)的便捷和保證。
特征
事實(shí)證明,與*競(jìng)爭(zhēng)對(duì)手的產(chǎn)品相比,Sinfection的轉(zhuǎn)染可在多種細(xì)胞系中提供更高水平的蛋白質(zhì)表達(dá)。對(duì)于大規(guī)模生產(chǎn)重組蛋白,Sinfection是實(shí)現(xiàn)適產(chǎn)量的宜選擇。此外,Sinfection還具有很高的轉(zhuǎn)染效率,可確保成功進(jìn)行轉(zhuǎn)染。
圖1在9個(gè)細(xì)胞系中比較了使用Sinfection和其他競(jìng)爭(zhēng)者進(jìn)行瞬時(shí)轉(zhuǎn)染的蛋白表達(dá)水平,其中6個(gè)顯示出被Sinfection(A?F)轉(zhuǎn)染的優(yōu)異結(jié)果。通過(guò)ELISA測(cè)定法確定蛋白質(zhì)表達(dá)水平。競(jìng)爭(zhēng)對(duì)手轉(zhuǎn)染試劑的轉(zhuǎn)染遵循制造商的規(guī)程。
通過(guò)Sinfection在96孔板中的0.1mL到生物反應(yīng)器中的50L的各種規(guī)模的瞬時(shí)或穩(wěn)定轉(zhuǎn)染,已經(jīng)成功表達(dá)了數(shù)百種重組抗體和蛋白質(zhì)。在所有規(guī)模的轉(zhuǎn)染應(yīng)用中使用Sinofection,將在很大程度上節(jié)省研究和生產(chǎn)成本。
1,轉(zhuǎn)染規(guī)程(35mm培養(yǎng)皿):
(1)細(xì)胞的制備
(2)Sinfection&DNA復(fù)合物的制備
用適當(dāng)?shù)南♂寗ㄈ鏟BS,NaCl溶液,葡萄糖溶液,DMEM,有或無(wú)血清的等滲溶液)稀釋DNA,以等滲形式稀釋至濃度為20μg/ mL(建議優(yōu)化),總體積為250μL。
在250μL培養(yǎng)基中稀釋適量的Sinofection。
將稀釋的DNA與稀釋的Sinofection混合(總體積= 500μL)。輕輕混合并在室溫下孵育20分鐘(溶液可能看起來(lái)混濁)。
(3)轉(zhuǎn)染
將500μL復(fù)合物逐滴添加至細(xì)胞和培養(yǎng)基中。輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)皿或孔,以確保均勻分布。
在蛋白質(zhì)表達(dá)測(cè)定之前,將細(xì)胞在37°C的CO 2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)18-48小時(shí)(通常在72小時(shí)后達(dá)到高表達(dá))。
2,轉(zhuǎn)染方案(瓶):
轉(zhuǎn)染細(xì)胞以表達(dá)蛋白質(zhì)此協(xié)議通常用于將DNA轉(zhuǎn)染到培養(yǎng)在燒瓶中的293 EBNA或CHO細(xì)胞中。使用前使用無(wú)菌DNA或?qū)NA進(jìn)行過(guò)濾滅菌(過(guò)濾后重新定量DNA)。
所有量均以每瓶為基礎(chǔ),在125 mL搖瓶中培養(yǎng)30 mL;有關(guān)其他格式,請(qǐng)參見(jiàn)表2。按比例放大或縮小轉(zhuǎn)染。
表2.使用Sinfection擴(kuò)大或縮小轉(zhuǎn)染。注意:實(shí)際條件應(yīng)通過(guò)實(shí)驗(yàn)優(yōu)化。
Sinofection顯示出極低的細(xì)胞毒性,該毒性已通過(guò)內(nèi)部WST-8測(cè)定法針對(duì)每批進(jìn)行測(cè)試和驗(yàn)證。WST-8測(cè)定基于線粒體脫氫酶對(duì)水溶性四氮唑(WST)的比色還原
甲dye染料溶液的吸光度與活細(xì)胞數(shù)成正比。與常用的WST-1方法相比,WST-8測(cè)定的靈敏度更高,而甲dye染料的溶解度和穩(wěn)定性更好。
圖3.分別用L2K和Sinfection轉(zhuǎn)染的HeLa細(xì)胞和DG44細(xì)胞的顯微鏡比較。按照制造商的建議進(jìn)行轉(zhuǎn)染。
圖4. Sinofection和L2K對(duì)4種細(xì)胞系的細(xì)胞毒性比較。按照制造商的建議進(jìn)行轉(zhuǎn)染。
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