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kamiyabiomedical KT-12247說明書

更新時間:2020-03-19      點擊次數(shù):847

kamiyabiomedical KT-12247說明書

Rat Creatine Kinase MB Isoenzyme (CKMB) ELISA

大鼠肌酸激酶同工酶(CKMB)ELISA
貨號:KT-12247

預期用途
該試劑盒是一種用于大鼠CKMB體外定量測定的夾心酶免疫分析方法
血清、血漿、組織勻漿、細胞裂解液、細胞培養(yǎng)上清液和其他生物液體。為了
僅供研究使用。

COMPONENTS

Reagents Quantity

Pre-coated, ready to use 96-well strip plate 1

Calibrator 2

Calibrator Diluent 1 × 20 mL

Detection Reagent A 1 × 120 μL

Detection Reagent B 1 × 120 μL

Assay Diluent A 1 × 12 mL

Assay Diluent B 1 × 12 mL

TMB Substrate 1 × 9 mL

Stop Solution 1 × 6 mL

Wash Buffer (30X concentrate) 1 × 20 mL

Plate sealer for 96 wells 4

需要但未提供的材料
一。帶450±10納米濾光片的微孔板閱讀器。
2。單通道或多通道移液管,具有高精度和一次性。
3。微離心管。
4。去離子水或蒸餾水。
5。吸墨紙吸墨紙吸墨紙。
6。洗滌液容器。
7。0.01 mol/L(或1x)磷酸鹽緩沖鹽(PBS),pH值7.0-7.2。

儲存
所有試劑應按小瓶上的標簽保存。校準器,檢測試劑A,
檢測試劑B和96孔板條板在收到后應存放在-20℃下,其他試劑應存放在-20℃下
應為4°C。未使用的板條應保存在密封袋中,并提供干燥劑
盡量減少暴露在潮濕空氣中。打開的測試包將保持穩(wěn)定1個月,前提是它存儲為
如上所述。

試驗原理
本試劑盒中提供的微孔板已預涂有CKMB特異性抗體。然后將校準品或樣品添加到適當?shù)奈⒖装迳希⒖装迳嫌幸环N針對CKMB的生物素結合抗體。接著,將親和素與辣根過氧化物酶(HRP)結合后,加入到每個微孔板中并孵育。加入TMB底物溶液后,只有含有CKMB、生物素結合抗體和酶結合親和素的微孔才會出現(xiàn)顏色變化。加入硫酸溶液終止酶-底物反應,并測量顏色變化
在450 nm±10 nm波長下進行分光光度測定。然后通過比較樣品的外徑和校準曲線來確定樣品中CKMB的濃度。
樣品收集和儲存
血清
使用血清分離管,使樣品在室溫下凝結2小時,或在4℃下凝結過夜,然后在約1000×g的條件下離心20分鐘。立即對新制備的血清進行分析,或在-20℃或-80℃下將樣品分批儲存,以備日后使用。避免反復凍融
循環(huán)。

等離子體
用EDTA或肝素作為抗凝劑收集血漿。在收集后30分鐘內,將樣品在1000 x g、4°C下離心15分鐘。立即取出血漿并進行分析,或在-20°C或-80°C下將樣品分批儲存,以備日后使用。避免重復凍融循環(huán)。
組織勻漿
組織勻漿的制備取決于組織類型。
一。組織在冰凍PBS中沖洗以*去除多余的血液,并在均質前稱重。
2。將組織切成小塊,在新鮮的裂解緩沖液(根據目標蛋白的亞細胞位置需要選擇不同的裂解緩沖液)(w:v=1:20-1:50,例如在20-50毫克的組織樣品中加入1毫升裂解緩沖液)中用玻璃均質機在冰上均質(微型組織研磨機也可以)。
三。所得懸浮液用超聲波細胞破膠劑進行超聲處理,直到溶液澄清。
四。然后,將勻漿在10000×g下離心5分鐘,收集上清液,立即或等分測定,并在≤-20℃下保存。
細胞裂解物在按照以下說明進行分析之前,需要對細胞進行裂解。
一。貼壁細胞用冷PBS輕輕洗滌,用胰蛋白酶分離,1000×g離心5分鐘(懸浮細胞可直接離心收集)。
2。在冷PBS中清洗細胞三次。
三。在濃度為107個/mL的新鮮溶解緩沖液中重新培養(yǎng)細胞,如有必要,可對細胞進行超聲波處理,直至溶液澄清。
四。在1500 x g下,在4°C下離心10分鐘,以去除細胞碎片。立即測定或等分,并儲存在≤-20°C下。
細胞培養(yǎng)上清液和其他生物液體
在1000 x g下離心樣品20分鐘。收集上清液并立即進行分析,或在-20°C或-80°C下分批儲存樣品以備日后使用。避免重復凍融循環(huán)。

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

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