BirA生物素蛋白連接酶(EC 6.3.4.15)激活生物素形成5'-腺苷酸生物素,并將生物素轉(zhuǎn)移至生物素受體蛋白(如AviTag™肽)。它還起著生物素操縱子阻遏物的作用。該蛋白質(zhì)由birA基因編碼。
請注意:我們強烈建議使用AviTag™氨基酸序列,而不是其他生物素肽序列。BirA酶以2倍于天然底物(BCCP)的反應(yīng)速率對AviTag™序列進(jìn)行生物素化處理,并且比使用中的其他肽序列高出一個數(shù)量級或更多。與其他Biotinylation-of-Peptide序列相比,AviTag™需要較少的酶量和較短的孵育時間,從而大程度地減少了與蛋白酶和蛋白質(zhì)不穩(wěn)定性相關(guān)的輔助問題。
套件隨附以下物品:
BirA生物素蛋白連接酶(EC 6.3.4.15)通過ATP中間體(生物素5'-腺苷酸)以高效且有針對性的方式將d-生物素共價添加到生物素受體肽/蛋白質(zhì)上。酶促生物素化蛋白的下游應(yīng)用是多種,重要和強大的。通常利用*的生物素-親和素/鏈霉親和素相互作用來進(jìn)行親和層析或?qū)⒌鞍踪|(zhì)固定在表面或底物上。通過抗生物素抗體或抗生物素蛋白/鏈霉親和素-報告酶偶聯(lián)物(-HRP,-堿性磷酸酶)或熒光探針進(jìn)行蛋白質(zhì)檢測成為可能。生物素化的MHC分子的多聚體形式是免疫生物學(xué)中流行的工具。
當(dāng)與我們的AviTag™生物素受體肽氨基酸序列結(jié)合使用時,生物素化的發(fā)生率是自然大腸桿菌BCCP底物的兩倍,并且比其他肽序列的生物素化高出一個數(shù)量級或更多。因此,與其他可用序列相比,AviTag™序列需要較少的BirA酶和較短的孵育時間即可完成生物素化反應(yīng)。如果需要考慮蛋白質(zhì)的不穩(wěn)定性或蛋白酶活性,這對于下游的成功可能很重要。
我們的BirA酶是野生型大腸桿菌,由birA基因編碼,并通過傳統(tǒng)方法純化至純度超過99%。該酶的其他名稱包括:生物素連接酶;生物素操縱子阻遏蛋白 birA; 生物素全酶合成酶;生物素-[乙酰-CoA羧化酶]合成酶;生物素-[乙酰-CoA-羧化酶]連接酶;生物素-[乙酰-CoA羧化酶]合成酶;乙酰輔酶A全羧化酶合成酶;乙酰輔酶A全羧化酶合成酶;生物素:脫羧羧化酶連接酶;生物素全酶合成酶;HCS。
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