区一区二区三中文字幕-中文字幕伦理一区二区三区-日韩午夜一区二区三区-久久国产老熟女老女人

您好!歡迎訪問上海起發(fā)實驗試劑有限公司網(wǎng)站!
全國服務(wù)咨詢熱線:

15921799099

當(dāng)前位置:首頁 > 技術(shù)文章 > proteinslides Ni-NTA或Cu-NTA表面

proteinslides Ni-NTA或Cu-NTA表面

更新時間:2020-11-12      點擊次數(shù):1032

proteinslides Ni-NTA或Cu-NTA表面

應(yīng)用說明: 

蛋白質(zhì)分子僅通過具有受控方向的poly-His標(biāo)簽連接到表面,否則將盡可能遠(yuǎn)離表面。這確保了天然狀態(tài)的蛋白質(zhì)活性。無需樣品預(yù)純化。

圖1.零背景Cu2 +表面由束縛在高密度PEG涂層上的螯合Cu2 +離子組成。蛋白質(zhì)分子通過多組氨酸標(biāo)簽特異性連接。 

重組蛋白通常與聚組氨酸(His)標(biāo)簽一起產(chǎn)生,以促進純化。這些蛋白質(zhì)現(xiàn)在用于蛋白質(zhì)微陣列的制造中。為了利用poly-His標(biāo)簽的可利用性,我們基于零背景PEG涂層開發(fā)了一種螯合的Cu2 +表面,如圖1所示。該表面的使用基本上省去了純化步驟,并將其直接摻入了蛋白質(zhì)固定化過程,即可以將粗裂解物直接用于微陣列制造,如圖2所示的綠色熒光蛋白(GFP)。除了N末端或C末端的多組氨酸標(biāo)簽外,由于PEG環(huán)境的排斥性,每個固定的蛋白質(zhì)分子都遠(yuǎn)離表面并使其與表面的相互作用小化。結(jié)果是,對蛋白質(zhì)天然構(gòu)象的干擾小?;瘜W(xué)環(huán)境的惰性和可控的取向都為固定的蛋白質(zhì)分子保留其天然構(gòu)象和活性提供了理想的環(huán)境,如圖3所示。對于6xHis標(biāo)記的磺基轉(zhuǎn)移酶和堿性磷酸酶,可控的取向固定在Cu2 + / PEG表面,其活性與溶液相幾乎相同。為了進行比較,以無規(guī)取向固定在3-氨丙基三乙氧基硅烷(γ-APS)涂層表面上的酶僅顯示約10%的活性。化學(xué)環(huán)境的惰性和可控的取向都為固定的蛋白質(zhì)分子保留其天然構(gòu)象和活性提供了理想的環(huán)境,如圖3所示。對于6xHis標(biāo)記的磺基轉(zhuǎn)移酶和堿性磷酸酶,可控的取向固定在Cu2 + / PEG表面,其活性與溶液相幾乎相同。為了進行比較,以無規(guī)取向固定在3-氨丙基三乙氧基硅烷(γ-APS)涂層表面上的酶僅顯示約10%的活性。化學(xué)環(huán)境的惰性和可控的取向都為固定的蛋白質(zhì)分子保留其天然構(gòu)象和活性提供了理想的環(huán)境,如圖3所示。對于6xHis標(biāo)記的磺基轉(zhuǎn)移酶和堿性磷酸酶,可控的取向固定在Cu2 + / PEG表面,其活性與溶液相幾乎相同。為了進行比較,以無規(guī)取向固定在3-氨基丙基三乙氧基硅烷(γ-APS)涂層表面上的酶僅顯示約10%的活性。

圖3.溶液相中酶活性與在γ-APS表面上隨機取向或在Cu2 + / PEG表面上受控取向的酶活性的比較。圖2.左側(cè)顯示了吸附在螯合的Cu2 + / PEG表面的6xHis標(biāo)簽的GFP的固有熒光。該表面可抵抗沒有His標(biāo)簽的GFP的非特異性吸附(右)。光斑直徑約0.2毫米。

Cu2 + / PEG表面上的排斥性2D化學(xué)環(huán)境不僅對固定化蛋白分子的活性至關(guān)重要,而且對維持和恢復(fù)這種活性也至關(guān)重要。后者在固定在三個不同表面上的6xHis-GFP變性和重新折疊的重復(fù)循環(huán)后的熒光顯微鏡圖像中得到證明(圖4):(a)Cu2 + / PEG表面;(b)Cu 2+離子螯合在3-氨基丙基三乙氧基硅烷(gama-APS)功能化表面的表面亞氨基二乙酸基團上;(c)用于非特異性蛋白質(zhì)吸附的γ-APS表面。盡管免疫染色顯示相似量的GFP,但三個表面的固有熒光強度卻有很大差異。Cu2 + / gamma-APS或gamma-APS表面的熒光強度為70%或< Cu 2+ / PEG表面的20%。盡管在變性步驟之后所有三個表面上均未檢測到熒光,但重新折疊的結(jié)果是表面化學(xué)性質(zhì)的強函數(shù)。在Cu2 + / PEG表面上,大多數(shù)熒光強度在重折疊步驟后得以恢復(fù)。相反,Cu2 + /γ-APS或γ-APS表面幾乎沒有熒光強度。在Cu2 + / PEG表面上,每個固定的GFP分子僅通過6xHis標(biāo)簽連接,但由于PEG功能的排斥性,更傾向于遠(yuǎn)離表面。表面的這種排斥或不結(jié)垢的性質(zhì)確保了弱的蛋白質(zhì)-表面相互作用不會在能量格局中為蛋白質(zhì)重新折疊引入額外的障礙。在gamma-APS表面上,GFP與附近的“粘性”或結(jié)垢–NH2官能團之間存在吸引人的非特異性相互作用。變性后,與粘性環(huán)境的這種非特異性相互作用有望增加,從而有效地在能量格局中引入了無法克服的障礙,從而使蛋白質(zhì)重新折疊。Cu2 + / PEG表面對蛋白質(zhì)分子進行芯片重折疊的能力為許多潛在應(yīng)用打開了大門,例如,直接在芯片上生成蛋白質(zhì)微陣列,從重組蛋白質(zhì)中去除包涵體等。這些涂層可供選擇在標(biāo)準(zhǔn)顯微鏡載玻片,蓋玻片和硅片上。我們的客戶已成功將Cu2 + / PEG表面應(yīng)用于各種應(yīng)用,包括蛋白質(zhì)傳感器,蛋白質(zhì)微陣列,單分子光譜,生物原子力顯微鏡和其他生物物理研究。即將推出:Cu2 + / PEG表面的三維(3D)版本正在開發(fā)中。微孔3D涂層提供的大表面積允許高聚His標(biāo)簽探針分子的高負(fù)載。這是檢測極低濃度生物標(biāo)志物的理想選擇。

圖4.在三個表面上變性(De)和再折疊(Re)循環(huán)前后的6xHis-GFP熒光顯微鏡圖像:(a)Cu2 + / PEG;(b)Cu2 //γ-APS;(c)γ-APS。變性涉及將6xHis-GFP涂層的表面浸入pH = 3.5的緩沖溶液中,而重新折疊對應(yīng)于將樣品與含有1xPBS,20%蔗糖和10%甘油的pH = 8.1的緩沖溶液一起孵育。

閱讀使用我們的Cu2 +表面發(fā)表的文章:蛋白質(zhì)組學(xué),2005,5,416;蛋白質(zhì)組學(xué),2007,7,1771; 自然方法,2008,5,507; BMC Biotech。,2009,1.等。

 

上海起發(fā)實驗試劑有限公司
地址:上海浦東川沙鎮(zhèn)川沙路6619號上海起發(fā)實驗試劑有限公司
郵箱:xs1@78bio.com
傳真:021-50724961
關(guān)注我們
歡迎您關(guān)注我們的微信公眾號了解更多信息:
歡迎您關(guān)注我們的微信公眾號
了解更多信息
国产欧美日韩综合精品二区| 亚洲精品高清国产一线久久| 日本高清不卡在线一区| 日韩一本不卡在线观看| 亚洲精品中文字幕在线视频| 国产欧美日本在线播放| 色婷婷日本视频在线观看| 好吊色免费在线观看视频| 欧美精品亚洲精品日韩精品| 在线观看免费视频你懂的| 中文字幕人妻av不卡| 狠狠干狠狠操在线播放| 日本免费熟女一区二区三区| 在线中文字幕亚洲欧美一区| 日本妇女高清一区二区三区| 91国自产精品中文字幕亚洲| 夫妻激情视频一区二区三区| 亚洲永久一区二区三区在线| 国产高清一区二区白浆| 丰满人妻熟妇乱又伦精另类视频| 激情爱爱一区二区三区| 国产午夜免费在线视频| 丝袜av一区二区三区四区五区| 久久久精品日韩欧美丰满| 亚洲日本久久国产精品久久| 青青免费操手机在线视频| 中文日韩精品视频在线| 人人爽夜夜爽夜夜爽精品视频| 大屁股肥臀熟女一区二区视频 | 九九热这里有精品20| 日韩偷拍精品一区二区三区| 国产原创激情一区二区三区| 黄色美女日本的美女日人| 欧美日韩国产综合特黄| 福利一区二区视频在线| 色狠狠一区二区三区香蕉蜜桃| 欧美人妻一区二区三区| 亚洲国产黄色精品在线观看| 男人和女人黄 色大片| 欧美日韩乱一区二区三区| 国产精品午夜视频免费观看|