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DENARASE®ELISA試劑盒

更新時間:2020-12-08      點擊次數(shù):1402

 

DENARASE®ELISA試劑盒

用戶說明

DENARASE ELISA試劑盒

ELISA法測定工藝衍生樣品中的沙雷菌核酸內切酶。

 

僅供研究和生產(chǎn)使用。

 

將可能含有粘質沙雷氏菌核酸內切酶的樣品在預包被有

特異性單克隆捕獲抗體以及不同核酸內切酶的標準曲線

 

預期用途

濃度。孵育和清洗后-

 

該ELISA試劑盒預期用于體外定量測定粘質沙雷氏菌核酸內切酶。該檢測可用于監(jiān)測從工藝相關樣品中去除核酸內切酶,如DENARASE®或Benzonase*核酸酶,以用于工藝開發(fā)和質量控制目的。該試劑盒僅供研究和生產(chǎn)使用,  不  預期用于診斷程序。

 

試驗原理

該DENARASE ELISA試劑盒是一種夾心ELISA,在微量檢測板形式中進行。

在除去未結合組分的步驟中,加入生物素結合的特異性單克隆檢測抗體。進一步洗滌步驟后,結合的檢測抗體與作為示蹤劑的酶結合物反應。終清洗步驟后,向孔中加入底物溶液并反應,導致顯色。采用光度測定法測量光密度,其與孔中的分析物濃度成正比??筛鶕?jù)相應的DENARASE標準曲線計算未知樣品中的核酸內切酶濃度。

 

表1:試劑盒中提供的試劑和材料

No.   試劑 詳細信息 數(shù)量

 

1 微量檢測板(即用型)

96孔(12條/8孔),用粘質沙雷氏菌核酸內切酶特異性單克隆抗體預包被

 

5個微孔板

 

3 稀釋緩沖液(10×)

含有表面活性劑和防腐劑的Tris緩沖鹽水,10×濃縮液

1 × 20 mL

5 檢測抗體(100×)

在含有防腐劑的緩沖溶液中,與生物素結合的粘質沙雷氏菌核酸內切酶特異性單克隆抗體,

100×濃縮液

 

1 × 0.75 mL

 

7 底物溶液 TMB One底物溶液,即用型 1 × 75 mL

 

需要但未隨兒童提供的材料和設備

 

 

用于稀釋清洗緩沖液和稀釋緩沖液的超純水(至少雙蒸水)(以10×濃縮液的形式提供)

用于清除微量測試平板清洗后殘留液體的吸水紙巾

用于制備標準品、對照品和樣品的適當試管

適用于清洗和稀釋緩沖液的容器

適用于有效多通道移液的試劑槽

孵育步驟期間覆蓋微量檢測板的蓋子

定軌微量測定板振蕩器(約500 rpm)和渦旋混合器

Microtest洗板機(也可以手動清洗)

精密移液器(可調體積,10 μL至5000 μL),帶適當槍頭

帶適當槍頭的多通道移液器(100 μL)

 

試劑的儲存

提供的所有試劑均應在2 ℃-10 ℃下冷藏保存,并應在失效日期前使用。

 

 

警告和注意事項

本試劑盒僅供研究和生產(chǎn)使用,僅應使用

由有資質的人員進行。

開始測定前,請仔細閱讀說明書。

記錄批號和失效日期。請勿混合不同批次的試劑。請勿使用過期試劑。

遵循藥物非臨床研究質量管理規(guī)范和安全性指南。必要時穿戴實驗服、一次性手套和防護鏡。

試劑制備

使用前將所有試劑和樣本恢復至室溫。

 

清洗緩沖液的制備(1×)

使用前,用超純水以10×(2)1:10的比例對清洗緩沖液進行潤滑(例如,100 mL 10×濃度溶液與900 mL超純水混合)。洗滌緩沖液(1×)在室溫下可穩(wěn)定儲存長達兩周。

 

制備  的  稀釋度  緩沖液  (1×)使用前用超純水以1:10稀釋10×濃縮液緩沖液(3)(例如,10 mL 10×濃縮液用90 mL超純水稀釋)。以下

稀釋緩沖液(1×)在室溫下可穩(wěn)定儲存長達2周。

 

試劑盒中的一些試劑含有Proclin®300 DENARASE標準品的制備

 

作為防腐劑。這些試劑可能引起眼睛和皮膚刺激,應謹慎處理。如果接觸眼睛或皮膚,立即用水沖洗。

避光儲存底物溶液。

終止液由0.5摩爾硫酸組成。該試劑具有腐蝕性,可能引起眼睛和皮膚刺激。應小心處理。如果接觸眼睛或皮膚,立即用水沖洗。

應將剩余的試劑盒試劑和制備的溶液視為具有潛在危害。

符合國家的安全指南和法規(guī)的廢物。

DENARASE ELISA的標準濃度應在進行測定前即刻使用試劑盒提供的DENARASE標準品(4)制備。標準品應僅在制備當天使用。

 

根據(jù)以下稀釋方案,在稀釋緩沖液(1×)中制備DENARASE ELISA標準品(pdi和S1-S8):

標準品

濃度

抗原體積[μL] 體積稀釋

 

ID [pg/ml]μL of

緩沖液[μL]

 

標準品

 

PD:預稀釋;S:標準品

 

制備檢測抗體工作溶液(1×)

稀釋檢測抗體100×濃縮液

(5) 用稀釋緩沖液(1×)以1:100稀釋。對于一個微量檢測板,將120 μL 100×濃縮液與12 mL稀釋緩沖液混合。該工作溶液應僅在制備當天使用。

 

酶結合物工作溶液的制備(1×)

稀釋酶結合物100 x濃縮液

(6) 用稀釋緩沖液(1×)以1:100稀釋。對于一個微量檢測板,將120 μL 100x濃縮液與12 mL稀釋緩沖液混合。該工作溶液應僅在制備當天使用。

 

樣品制備

應通過離心去除樣品中存在的任何聚集體,以確保適當?shù)姆治鲂阅堋?/p>

一般而言,所有樣品工作稀釋液應僅在制備當天使用。

測定前,應使用稀釋緩沖液(1×)稀釋樣本。小樣品稀釋度應為1:2。

 

 

試驗程序

所有ELISA步驟均在室溫(18 ℃-26 ℃)下進行

使用前,使試劑盒中的所有材料和試劑達到室溫。

在達到室溫之前,請勿打開預包被微孔板(1)的箔袋。

試驗中未使用的剩余平板條應重新裝入含干燥劑的袋中。密封袋子,用于冷藏儲存。在所有孵育步驟中,平板應蓋上蓋子(試劑盒未提供),以防止溶液蒸發(fā)和污染。

 

1. 培養(yǎng)  其中  標準品   和   樣品:用100 μL/孔的DENARASE標準品和試驗對照品填充微孔板,作為稀釋樣品,并在500 rpm下連續(xù)振蕩孵育1小時。標準品、試驗對照品和樣品應至少重復分析兩次。建議一式三份。

 

2. 清洗:

除去微孔內容物,用250 μL/孔的清洗緩沖液(1×)清洗微孔板4次。清洗后,倒置平板以倒出孔中的內容物。吸干并在干凈的吸水紙上用力敲擊,丟棄任何殘留液體。

 

3. 用檢測抗體孵育:

 

7. 用底物溶液孵育并終止:

加入100 μL/孔的底物溶液(7),連續(xù)振蕩孵育15 min。如果15 min后顯色過低,底物孵育時間可延長至30 min。通過直接加入100 μL/孔的終止液(8)終止顯色反應,得到黃色產(chǎn)物。

 

8. 測量:

用多通道酶標儀測定450 nm處的光密度(OD450)。

推薦參考波長在620 nm和690 nm之間。

 

用100 μL/孔的檢測器填充微孔板

 

抗體工作液(1×)和孵育液

連續(xù)振搖0.5小時。

 

4. 清洗:

取出孔中的內容物并清洗

平板4×,250 μL/孔的清洗緩沖液(1×)。清洗后,倒置平板以倒出孔中的內容物。吸干并在干凈的吸水紙上用力敲擊,丟棄任何殘留液體。

 

5. 用酶結合物孵育:

向平板中加入100 μL/孔的酶結合物工作溶液(1×),孵育20 min,期間不斷振搖。

 

6. 清洗:

取出孔中的內容物并清洗

平板4×,250 μL/孔的清洗緩沖液(1×)。清洗后,倒置平板以倒出孔中的內容物。吸干并在干凈的吸水紙上用力敲擊,丟棄任何殘留液體。

計算

計算各標準品、對照品和樣品重復OD450值的平均值。借助適當?shù)能浖?chuàng)建標準曲線,好使用四參數(shù)或五參數(shù)方程的非線性回歸模式。根據(jù)校準曲線計算的未知樣本濃度必須乘以樣本的稀釋因子。

 

 

ELISA性能特征

分析靈敏度

檢測限(LOD)定義為可與分析空白區(qū)分的低核酸內切酶濃度,經(jīng)計算約為4 pg/ml。通過計算內切核酸酶濃度測定檢測限,該濃度對應于高于分析空白平均OD450三個標準偏差的OD450值。

在對應于三倍LOD的濃度下確認了定量限(LOQ)。LOQ為12 pg/ml。

 

工作范圍

DENARASE ELISA的工作范圍定義為32 pg/ml至1000 pg/ml核酸內切酶。

注:基于2018年10月生成的數(shù)據(jù)。

 

故障排除

以下列出了分析性能不充分的可能原因。

 

A.整個平板中無反應性省略孵育步驟或試劑以錯誤順序使用試劑ELISA組分制備不充分-

nents/-試劑

 

C. 整個平板的反應性和/或分析背景過高

不正確的清洗步驟

ELISA組分/試劑的儲存或制備不充分

試劑的過度孵育,例如在停止前用底物溶液孵育

 

D. 批內精密度差(重復的CV過高)

不正確的清洗步驟

標準品、樣品和試驗對照樣品混合不充分

樣本制備不當(碎屑)

或樣本中的聚集體通過增加不精密度干擾分析性能

 

B.整個平板反應性差 并應通過離心去除)

ELISA組分/試劑的儲存或制備不充分

使用前不允許試劑達到室溫

測量光密度的波長不正確

 

 

DENARASE是c-LEcta GmbH在歐盟、美國、中國、印度、日本和韓國的注冊商標。

*苯并酶核酸內切酶是Merck KGaA的注冊商標

訂購信息:

DENARASE ELISA試劑盒

 DENARASE ELISA Kit

Article NoDENARASE  41901-1

Contents according table 1

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