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encapsula IMD-1011說明書

更新時間:2021-03-11      點擊次數(shù):1758

encapsula IMD-1011說明書

 

Immunodox®-Folate (PEGylated)

SKU# IMD-1011

SIZEPRICE
2-ml$850.00
5-ml$1,900.00

描述

在過去的五十年中,已經(jīng)使用各種類型的化學方法將諸如抗體,肽,蛋白質(zhì)或其他反應(yīng)性配體的分子綴合到脂質(zhì)體的表面。通常,可以通過N端,C端或可利用的硫(例如, Fab'級分或硫醇化抗體)來實現(xiàn)綴合并非所有化學方法都具有相同的結(jié)合收率和效率,經(jīng)常要生產(chǎn)生物相容性批次可能是一個挑戰(zhàn)。

葉酸結(jié)合蛋白(FBP)是一種內(nèi)源性蛋白,對葉酸具有很高的親和力。抗體可以通過FBP標記,免疫脂質(zhì)體可以通過FBP與脂質(zhì)體表面的葉酸脂質(zhì)之間的非共價和高親和力相互作用形成。在這種方法中,已經(jīng)通過硫醚鍵與FBP共價連接的抗體與葉酸衍生物脂質(zhì)體偶聯(lián)。具有相對較低的分子量(MW?40 kDa)和單個結(jié)合位點可防止脂質(zhì)體交聯(lián)。

配方信息

葉酸Immunodox®(聚乙二醇化)

脂質(zhì)組成濃度(mg / ml)濃度(mM)摩爾比百分比
氫化大豆PC9.5812.2257
膽固醇3.198.2538
DSPE-聚乙二醇(2000)2.70.964.5
DSPE-PEG(2000)-葉酸鹽
0.390.120.5
全部的15.86毫克/毫升21.55毫米100
緩沖液,脂質(zhì)體大小和封裝的藥物濃度規(guī)格
內(nèi)部緩沖區(qū)硫酸銨
外部緩沖區(qū)磷酸鹽緩沖溶液
pH值7.4
脂質(zhì)體大小100納米
封裝的阿霉素2毫克/毫升(3.45毫米)

結(jié)合方案

材料和設(shè)備

為了將用FBP標記的抗體或蛋白質(zhì)與Immunodox®-葉酸脂質(zhì)體偶聯(lián),您需要:

  1. 建議使用實驗室渦旋混合器。
  2. 透析需要實驗室磁力攪拌器。
  3.  具有適當MWCO的Float-A-Lyzer®可以輕松清除游離和非結(jié)合蛋白/肽/配體的脂質(zhì)體結(jié)合配體。您需要確保MWCO低于1,000,000道爾頓。在1,000,000道爾頓時,透析膜上的孔徑接近100 nm,因此可以透析您的脂質(zhì)體。您不能盲目使用透析盒。在使用離心柱或透析盒之前,請先了解該技術(shù)。如果未使用正確的MWCO,則可能會失去全部準備。對于此協(xié)議,我們建議MWCO為300,000道爾頓。

制備方法

  1. 葉酸中的總脂質(zhì)濃度為21.55 mM。脂質(zhì)體中0.5%mol的脂質(zhì)包含PEG-葉酸酯基團,并且只有一半暴露于脂質(zhì)體的外部,這等于0.053 mM的反應(yīng)性結(jié)合脂質(zhì)。對于2ml體積的脂質(zhì)體,其等于1.08×10 -7 mol,對于5ml體積的脂質(zhì)體,其等于2.69×10 -7 mol的PEG-葉酸酯。 將FBP標記的抗體與PEG-葉酸酯脂質(zhì)的摩爾比添加為1:20。
  2. 在室溫下將Immunodox®-Folate與抗體-FBP一起孵育1小時。
  3. 透析除去非結(jié)合的抗體,蛋白質(zhì),肽或配體。與尺寸排阻色譜柱相比,我們更喜歡透析。透析的過程要慢得多,但是從非結(jié)合蛋白/多肽/配體中清除了制備物后,免疫脂質(zhì)體的損失將降旋轉(zhuǎn)柱要快得多,但您很容易損失掉旋轉(zhuǎn)柱上50%以上的脂質(zhì)體。我們建議使用Spectrum Labs的Float-A-Lyzer®透析盒。您需要根據(jù)蛋白質(zhì),配體,抗體或抗體片段的分子量選擇合適的MWCO盒。 筆記:如果決定使用透析盒,則需要確保MWCO低于1,000,000道爾頓。在1,000,000道爾頓時,透析膜上的孔徑接近100 nm,因此可以透析您的脂質(zhì)體。您不能盲目使用透析盒和離心柱。它們有各種尺寸,您需要明智地選擇正確的尺寸。在1升pH 7.4的PBS中透析免疫脂質(zhì)體溶液8小時。用新鮮的1升PBS更換透析緩沖液,再透析8小時。完成此步驟后,即可使用旋轉(zhuǎn)柱或透析盒來使用已清理的免疫脂質(zhì)體。如果未使用正確的MWCO,則可能會失去全部準備。

脂質(zhì)體顆粒計算器

Immunodox®脂質(zhì)體是單層的,尺寸為100 nm。脂質(zhì)體的摩爾濃度為21.55mM。通過具有 脂質(zhì)體直徑(nm)和脂質(zhì)濃度(µM),您可以計算出一個脂質(zhì)體中脂質(zhì)的總數(shù)和一毫升脂質(zhì)體溶液中脂質(zhì)體的數(shù)目。要使用計算器,請單擊 此處

技術(shù)說明

  • 阿霉素是具有λex 470 nm和λem 585 nm的熒光分子。如果您在抗體或配體上使用熒光標簽,則需要確保它們不會互相干擾。
  • 請記住,表面含有葉酸的脂質(zhì)體的主要用途是靶向細胞上的葉酸受體。使用標記有FBP的抗體/蛋白質(zhì)或配體制備免疫脂質(zhì)體是非常利基的應(yīng)用。
  • 由于暴露于低pH下葉酸和FBP之間的親和力降低,免疫脂質(zhì)體在暴露于內(nèi)體小室的低pH環(huán)境后通過內(nèi)吞作用而被內(nèi)在化后可能會解體。通過允許將內(nèi)化的脂質(zhì)體分選到適當?shù)膩喖毎麉^(qū)室和/或促進藥物分子從脂質(zhì)體的細胞內(nèi)釋放,這種內(nèi)化觸發(fā)的解偶聯(lián)可能有益于在細胞水平上遞送脂質(zhì)體藥物。
  • 可以使用尺寸排阻旋轉(zhuǎn)柱(例如Sepharose®CL-4B)代替Float-A-Lyzer®透析盒。但是,在純化過程中,大量的脂質(zhì)體會粘在色譜柱上,因此我們強烈建議使用透析法,而不是使用大小排他的珠子。
  • 如果您使用的是疏水的配體或肽,則建議將其溶解在DMSO或DMF中,然后向其中添加緩沖液。建議溶液中使用的DMSO或DMF量不超過5%。DMF和DMSO均與脂質(zhì)體相容,并且也可與水混溶。其他有機溶劑(例如乙醇和氯方)與脂質(zhì)體不相容,會導致脂質(zhì)體裂解。如果終使用DMSO或DMF,那么在完成偶聯(lián)反應(yīng)后,您需要從脂質(zhì)體中除去DMSO和DMF。為此,您需要使用由再生纖維素膜制成的透析盒。注意:并非所有膜都與DMF和DMSO兼容。我們建議使用Slide-A-Lyzer™MINI透析設(shè)備 由ThermoFisher生產(chǎn)的再生纖維素膜制成的MWCO為2K。去除DMSO或DMF后,您可以使用Float-A-Lyzer®透析設(shè)備進行清理準備的后一步。
  • 脂質(zhì)體應(yīng)保持在4°C且切勿冷凍。

 

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