antibodies-online ABIN2014351說明書

MMAE Antibody Drug Conjugate (ADC) ELISA Kit

MMAE抗體藥物偶聯(lián)物（ADC）ELISA試劑盒

目標(biāo)

MMAE抗體藥物偶聯(lián)物（ADC）

 

反應(yīng)性

化學(xué)制品

 

檢測方法

比色法

方法類型

競爭ELISA

檢測范圍

0.0435-4000微克/毫升

檢測限

0.0435微克/毫升

應(yīng)用

酶聯(lián)免疫吸附

目的

該測試試劑盒旨在定量測定測試樣品中的抗體-MMAE-綴合物水平。對于MMAE抗體藥物偶聯(lián)物（ADC）的臨床前和臨床藥理學(xué)研究非常有用。
該試劑盒可直接使用來自組織/細(xì)胞培養(yǎng)物的樣品以及來自人，大鼠，小鼠，靈長類動物等的血清樣品。-使用此試劑盒可測量基于人源化單克隆抗體的MMAE-ADC和基于小鼠單克隆抗體的MMAE-ADC成套工具。

牌

EDI™

樣品類型

組織樣本，血清

分析方法

定量的

交叉反應(yīng)（詳細(xì)信息）

此MMAE-ADC EIA與MMAF-ADC，DM1-ADC和DUO-6-ADC沒有交叉反應(yīng)。

組件

1.抗MMAE抗體包被的微孔板。一個微孔板，上面涂有十二乘八小條（總共96孔），并涂有特異性抗MMAE抗體。將板框起來并密封在帶有干燥劑的鋁箔拉鏈袋中。該試劑應(yīng)在2-8°C下保存，并且在試劑盒上的有效期之前一直穩(wěn)定。
2. HRP結(jié)合的MMAE。一個小瓶在穩(wěn)定的蛋白質(zhì)基質(zhì)中包含3 mL即用型HRP標(biāo)記的MMAE。該試劑應(yīng)在2-8°C下保存，并且在試劑盒上的有效期之前一直穩(wěn)定。
3. ELISA洗滌濃縮液。一瓶裝有3 mL 30倍濃縮液。使用前，內(nèi)容物必須用87毫升軟化水稀釋并充分混合。稀釋后，產(chǎn)生一種工作洗滌溶液，其在磷酸鹽緩沖鹽水中包含表面活性劑以及非疊氮化物，非汞防腐劑。稀釋后的洗滌溶液可以在室溫下保存，并且在試劑盒上一直穩(wěn)定到有效期。
4. ELISA HRP底物。一瓶裝有15 mL過氧化氫的四甲基聯(lián)苯胺（TMB）。該試劑應(yīng)在2-8°C下保存，并且在試劑盒上的有效期之前一直穩(wěn)定。
5. ELISA終止液。一瓶裝有15 mL終止液。該試劑可在2-8°C或室溫下保存，并且在試劑盒上的有效期之前一直穩(wěn)定。
6.抗體-MMAE共軛零校準(zhǔn)物。一個裝有30mL零校正劑的小瓶（30711）。該試劑用于稀釋校準(zhǔn)儲備tmake分析校準(zhǔn)物，以及稀釋測試樣品。該試劑應(yīng)在2-8°C下保存，并且在試劑盒上的有效期之前一直穩(wěn)定。
7.抗體-MMAE共軛校準(zhǔn)液。試劑盒中未提供（可選）一個小瓶（3071 
2.在無凍干劑的凍干（0.5 mL）血清基基質(zhì)中包含標(biāo)準(zhǔn)抗體-MMAE-綴合物的儲備液，請參閱該小瓶以獲取有關(guān)其準(zhǔn)確濃度的信息。該試劑應(yīng)在2-8°C下保存，并且在試劑盒上的有效期之前一直穩(wěn)定。

不含材料

1.抗體-MMAE共混物
2.能夠輸送2μL，50μL，100μL等的精密單通道移液器
3.適用于上述體積分配的一次性移液器吸頭
4.鋁箔
5.去離子水或蒸餾水
6.塑料微量滴定器孔蓋或聚乙烯薄膜
7. ELISA多通道洗滌瓶或自動（半自動）洗滌系統(tǒng)
8.分光光度計酶標(biāo)儀，能夠讀取450/650或450/2處的吸光度。納米

 

 

• 測定時間

  4小時

  盤子

  預(yù)涂

  協(xié)議

  此EIA試劑盒是為定量測定血清中的MMAE偶聯(lián)物而設(shè)計，開發(fā)和生產(chǎn)的。該測定利用競爭性免疫測定技術(shù)，該抗體具有僅與MMAE結(jié)合的抗體。測定校準(zhǔn)物（抗體MMAE共軛物）和測試血清樣品直接添加到涂有特異性抗MMAE抗體的微量滴定板的孔中。隨后，將辣根過氧化物酶（HRP）共軛的MMAE添加到每個孔中。在溫育期間，抗體MMAE綴合物與HRP綴合的MMAE競爭抗MMAE抗體的有限結(jié)合位點(diǎn)。形成了包被良好的抗-MMAE抗體HRP綴合的MMAE的免疫復(fù)合物。未結(jié)合的抗體和緩沖液基質(zhì)在隨后的洗滌步驟中被去除。為了檢測這種免疫復(fù)合物，然后在定時反應(yīng)中將孔與底物溶液孵育，然后用酸性試劑（即ELISA終止溶液）終止反應(yīng)。然后在分光光度計酶標(biāo)儀中測量吸光度。結(jié)合到每個微量滴定孔壁上的免疫復(fù)合物的酶促活性與測試樣品中抗體-MMAE偶聯(lián)物的量成反比。通過在4參數(shù)或log-logit曲線擬合上繪制每個校準(zhǔn)器的吸光度與相應(yīng)抗體-MMAE共軛物濃度的關(guān)系來生成校準(zhǔn)曲線。直接從該校準(zhǔn)曲線確定測試樣品中抗體-MMAE綴合物的濃度。ELISA終止液）。然后在分光光度計酶標(biāo)儀中測量吸光度。結(jié)合到每個微量滴定孔壁上的免疫復(fù)合物的酶促活性與測試樣品中抗體-MMAE偶聯(lián)物的量成反比。通過在4參數(shù)或log-logit曲線擬合上繪制每個校準(zhǔn)器的吸光度與各自的抗體-MMAE綴合物濃度的關(guān)系來生成校準(zhǔn)曲線。直接從該校準(zhǔn)曲線確定測試樣品中抗體-MMAE綴合物的濃度。ELISA終止液）。然后在分光光度計酶標(biāo)儀中測量吸光度。結(jié)合到每個微量滴定孔壁上的免疫復(fù)合物的酶促活性與測試樣品中抗體-MMAE偶聯(lián)物的量成反比。通過在4參數(shù)或log-logit曲線擬合上繪制每個校準(zhǔn)器的吸光度與各自的抗體-MMAE綴合物濃度的關(guān)系來生成校準(zhǔn)曲線。直接從該校準(zhǔn)曲線確定測試樣品中抗體-MMAE綴合物的濃度。結(jié)合到每個微量滴定孔壁上的免疫復(fù)合物的酶促活性與測試樣品中抗體-MMAE偶聯(lián)物的量成反比。通過在4參數(shù)或log-logit曲線擬合上繪制每個校準(zhǔn)器的吸光度與各自的抗體-MMAE綴合物濃度的關(guān)系來生成校準(zhǔn)曲線。直接從該校準(zhǔn)曲線確定測試樣品中抗體-MMAE綴合物的濃度。結(jié)合到每個微量滴定孔壁上的免疫復(fù)合物的酶促活性與測試樣品中抗體-MMAE偶聯(lián)物的量成反比。通過在4參數(shù)或log-logit曲線擬合上繪制每個校準(zhǔn)器的吸光度與各自的抗體-MMAE綴合物濃度的關(guān)系來生成校準(zhǔn)曲線。直接從該校準(zhǔn)曲線確定測試樣品中抗體-MMAE綴合物的濃度。

  試劑準(zhǔn)備

  （1）在使用前，讓所有試劑達(dá)到室溫。來自不同試劑盒批號的試劑不應(yīng)合并或互換。
  （2）使用前必須將ELISA洗提液稀釋至工作溶液。有關(guān)詳細(xì)信息，請參見“試劑”部分。
  （3）使用EDI校準(zhǔn)器：用0.5 mL去離子水重新配制校準(zhǔn)液。稀釋重建的校準(zhǔn)原液將足夠數(shù)量的抗MMAE抗體包被的微孔板放入支架中，以一式兩份確定校準(zhǔn)物和未知樣品。

  檢驗(yàn)程序

  （1）將100μL校準(zhǔn)物和測試樣品添加到微孔中。
  （2）安全地密封板孔，用箔紙或其他材料遮蓋以防光照，然后在ELISA板振動器（小軌道半徑）上以400至450 rpm的轉(zhuǎn)速旋轉(zhuǎn)30分鐘。
  （3）立即向每個孔中加入25μLHRP共軛MMAE。（注意：添加HRP共軛MMAE之前無需執(zhí)行洗滌步驟）
  （4）牢固密封板孔，用箔紙或其他材料遮蓋以防光照，然后在ELISA板振蕩器（小軌道半徑）上旋轉(zhuǎn)2個小時。400至450 rpm時10分鐘。
  （5）通過向每個孔中分配350μL的工作洗滌溶液，將每個孔洗滌5次，然后*吸出內(nèi)容物?；蛘撸梢允褂米詣游⒖装迩逑礄C(jī)。
  （6）將100μLELISA HRP底物添加到每個孔中。
  （7）用鋁箔或其他材料覆蓋板，以避免暴露在光線下。在室溫下靜置板靜置20分鐘。
  （8）立即將100μLELISA終止溶液添加到每個孔中。輕輕混合。
  （9）讀取450 nm處的吸光度。

  計算結(jié)果

  建議使用4參數(shù)或log-logit校準(zhǔn)曲線擬合。
  1.計算每對重復(fù)測試結(jié)果對的平均吸光度
  2.校正曲線是通過所有校正劑水平在縱坐標(biāo)上相對于校正劑濃度的校正吸光度生成的。應(yīng)使用適當(dāng)?shù)挠嬎銠C(jī)輔助數(shù)據(jù)縮減程序來計算結(jié)果。直接使用各自校正的吸光度從校準(zhǔn)曲線中讀取測試樣品的抗體-MMAE綴合物濃度。

  測定精度

  通過在八次重復(fù)測定中測量三個校正劑（L3，L6和L8）來驗(yàn)證測定內(nèi)的精密度。CV％為7.1％，6.7％和11.0％。

  限制

  僅供研究使用

• 使用注意事項(xiàng)

  試劑必須在專業(yè)實(shí)驗(yàn)室中使用。包含牛血清的試劑的原材料來自連續(xù)的48個美國。它僅從在獸醫(yī)監(jiān)督下飼養(yǎng)的健康供體動物中獲得，并且沒有發(fā)現(xiàn)傳染性疾病。在進(jìn)行此測定時，請戴上手套并處理這些試劑，就好像它們具有潛在的傳染性一樣。避免與含有TMB，過氧化氫或硫酸的試劑接觸。TMB可能會刺激皮膚和粘膜，并引起皮膚過敏反應(yīng)。TMB是可疑的致癌物。硫酸與皮膚接觸可能會引起嚴(yán)重刺激。請勿進(jìn)入眼睛，皮膚或衣服。不要攝入或吸入煙氣。接觸時，用大量水沖洗至少15分鐘。使用良好的實(shí)驗(yàn)室規(guī)范。

  貯存

  4°攝氏度

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  目標(biāo)

  MMAE抗體藥物偶聯(lián)物（ADC）

   

  目標(biāo)類型

  抗體