高分子量基因組 DNA:使用 Ocean NanoTech 的 Blood gDNA 試劑盒從全血中分離出高分子量的高分子量基因組 DNA。3 x 350 µL 全血/供體通過 Ocean NanoTech 試劑盒進(jìn)行處理,并以 100 µL 洗脫。500 納克純化的 DNA 在 1% 瓊脂糖凝膠/TAE 上與 GeneRuler™1kb Plus 階梯(Thermo Scientific)一起電泳;最上面的 DNA 梯帶是 20,000 bp。
來自全血的高純度基因組 DNA,不含 RNase:使用 Ocean NanoTech 的 Blood gDNA 試劑盒從全血中分離的高純度基因組 DNA。3 x 350 µL 全血/供體通過 Ocean NanoTech 試劑盒進(jìn)行處理,并以 100 µL 洗脫。通過分光光度法分析洗脫的DNA以確定純度比和DNA濃度。
來自全血的無抑制劑基因組 DNA:分離的基因組 DNA 的 SPUD 分析表明不存在共純化的抑制劑。3 x 350 µL 全血/供體通過 Ocean NanoTech 試劑盒進(jìn)行處理,并以 100 µL 洗脫。如 Analytical Biochemistry, 2006 Apr 15;351(2):308-10 中詳述的,對(duì) 100 ng 洗脫的 DNA 進(jìn)行了抑制 SPUD 擴(kuò)增子擴(kuò)增的能力分析。觀察到的 Cq 與分離的 DNA 模板相對(duì)于 SPUD 陽性對(duì)照的均勻性表明分離的 DNA 不含 PCR/qPCR 抑制劑。
基因組靶標(biāo)的成功qPCR擴(kuò)增:對(duì)分離的基因組DNA的qPCR分析表明,基因組靶標(biāo)的成功擴(kuò)增和檢測(cè)。3 x 350 µL 全血/供體通過 Ocean NanoTech 試劑盒進(jìn)行處理,并以 100 µL 洗脫。使用 ABI TaqMan™ β-肌動(dòng)蛋白 qPCR 測(cè)定法測(cè)定標(biāo)稱 20 ng 洗脫的 DNA(基于 Nanodrop 分析)。標(biāo)準(zhǔn)曲線跨越了 100 – 0.032 ng(27,600 – 8.8 個(gè)基因組當(dāng)量)的人類 DNA。測(cè)定效率計(jì)算為 102%。
分離的基因組 DNA 的酶促修飾:使用 Ocean NanoTech 的 Blood gDNA 試劑盒對(duì)從全血中分離的基因組 DNA 進(jìn)行限制性消化。3 x 350 µL 全血/供體通過 Ocean NanoTech 試劑盒進(jìn)行處理,并以 100 µL 洗脫。1 µg 純化的 DNA 在 37°C 下用 BamHI、BglII 和 BamHI+BglII 消化 30 分鐘。此后限制性產(chǎn)物在1%瓊脂糖凝膠/TAE上電泳1小時(shí)。
從分離的基因組和線粒體 DNA 進(jìn)行長(zhǎng)距離 PCR :使用 Ocean NanoTech 的 Blood gDNA 試劑盒對(duì)從全血中分離的基因組 DNA 進(jìn)行長(zhǎng)距離 PCR。3 x 350 µL 全血/供體通過 Ocean NanoTech 試劑盒進(jìn)行處理,并以 100 µL 洗脫。使用 TaKaRa LA Taq® 和 (A) 7.3 kb 人葡糖腦苷脂酶片段和 (B) 8.2 kb 線粒體 NADH-泛醌氧化還原酶鏈 1 (MT-ND1) 片段的引物,通過 PCR 擴(kuò)增 20 ng 純化 DNA。 PCR 產(chǎn)物在 1% 瓊脂糖凝膠/TAE 上電泳 1 小時(shí)。這些高分子量目標(biāo)的成功 PCR 擴(kuò)增突出了分離 DNA 的結(jié)構(gòu)完整性和我們的試劑盒分離線粒體 DNA 的能力。
與商業(yè)血液穩(wěn)定劑管的兼容性: 血液基因組 DNA 試劑盒可用于從商業(yè)血液穩(wěn)定劑管中分離不含抑制劑的 gDNA。將捐獻(xiàn)者血液抽取到 3 種市售血液穩(wěn)定產(chǎn)品中,并在室溫下儲(chǔ)存 4 天。使用標(biāo)準(zhǔn)方案通過 Ocean NanoTech 試劑盒處理來自試管的 350 µL 等分試樣。作為穩(wěn)定過程的一部分,DNA/RNA Shield™ 管也沒有使用 Ocean NanoTech 裂解緩沖液進(jìn)行處理,因?yàn)?DNA/RNA Shield™ 裂解細(xì)胞。如分析生物化學(xué),2006 年 4 月 15 日;351(2):308-10 中詳述的,測(cè)定了從每次分離中洗脫的 100 ng DNA 抑制 SPUD 擴(kuò)增子擴(kuò)增的能力。觀察到的 Cq 與分離的 DNA 模板相對(duì)于 SPUD 陽性對(duì)照的均勻性表明分離的 DNA 不含 PCR/qPCR 抑制劑。
性能與其他商用產(chǎn)品的對(duì)比: Ocean NanoTech的Blood gDNA試劑盒大大優(yōu)于其他基于磁珠的血液gDNA分離試劑盒。來自同一供體的血液被吸入 K2-EDTA 管中,并使用試劑盒所需的輸入血量通過每個(gè)試劑盒處理。分離的 DNA 以 100 µL 洗脫,并通過 NanoDrop 分析和 Qubit 分析評(píng)估純度。計(jì)算每個(gè)試劑盒的總產(chǎn)量(基于 Qubit 測(cè)量)和作為血液輸入量函數(shù)的產(chǎn)量。所有值均來自三個(gè)生物學(xué)重復(fù)。
目錄# | 產(chǎn)品 | 單元尺寸 | 單價(jià) |
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B0711-096 | PureBind血液基因組DNA分離試劑盒 | 1微米 | 199.00 美元 |
B0711-384 | PureBind血液基因組DNA分離試劑盒 | 10納米 | $ 677.00 |
產(chǎn)品描述 | PureBind血液基因組DNA分離試劑盒 |
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應(yīng)用 | 從全血中分離核酸 |
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