polyplus-transfection INTERFERin說明書
試劑 | 干擾素® |
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分子交付 | siRNA、miRNA (microRNA) 和其他寡核苷酸:pre-miRNA、模擬 miRNA、antimiR…… |
應(yīng)用 | siRNA和其他寡核苷酸的轉(zhuǎn)染 |
細(xì)胞類型 | 貼壁細(xì)胞和懸浮細(xì)胞 |
轉(zhuǎn)染次數(shù) | 1 ml INTERFERin ®足以在 24 孔板中進(jìn)行 500-1000 次轉(zhuǎn)染。 |
貯存 | 5°C ± 3°C,適當(dāng)儲存時(shí)可穩(wěn)定 6 個(gè)月 (409-01) 至至少一年(其他包裝尺寸) |
INTERFERin®在1 nM siRNA 時(shí)已提供非常高的沉默效率,可用于多種貼壁細(xì)胞和懸浮細(xì)胞。使用低濃度的 siRNA可避免脫靶效應(yīng),其溫和的作用模式可確保更可靠的數(shù)據(jù)和出色的細(xì)胞活力。由于其與血清和抗生素的兼容性,INTERFERin®易于使用,也非常適合轉(zhuǎn)染 miRNA 和其他寡核苷酸,如 pre-miRNA、模擬 miRNA、antimiR……。
試劑量 | 參考編號 |
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0.1毫升 | 409-01 |
1毫升 | 409-10 |
5 x 1 毫升 | 409-50 |
一些出版物表明,轉(zhuǎn)染低濃度的 siRNA 可避免脫靶效應(yīng)。事實(shí)上,當(dāng)以高濃度轉(zhuǎn)染 siRNA 時(shí),會(huì)觀察到這些不需要的非特異性副作用 (1,2)。因此,可以通過使用盡可能少的 siRNA 來提高實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的可靠性。這就是 INTERFERin ®專門設(shè)計(jì)用于使用低 siRNA 濃度提供高沉默效率的原因。
INTERFERin ®介導(dǎo)的 1 nM 特定 siRNA 遞送顯示出選擇性和高效的基因表達(dá)敲低,而競爭對手 (L2K) 需要至少 10 nM siRNA 才能達(dá)到 50% 的沉默效率(圖 1)。
圖 1:INTERFERin ®只需要 1 nM siRNA 即可實(shí)現(xiàn)有效的基因沉默。根據(jù)制造商的建議,使用 INTERFERin ®或競爭產(chǎn)品 L2K用抗 Luc siRNA 轉(zhuǎn)染穩(wěn)定表達(dá)螢火蟲熒光素酶的 3LL 細(xì)胞。48 小時(shí)后使用常規(guī)測定法測量熒光素酶表達(dá)。對照siRNA未觀察到抑制作用。
令人驚訝的是,在 10 pM siRNA 下仍然實(shí)現(xiàn)了 50% 的沉默(圖 2)。
圖 2:即使在 siRNA 濃度極低的情況下,INTERFERin ®也非常高效。A549-染GL3Luc細(xì)胞在血清的存在下與使用INTERFERin抗呂克的siRNA的遞減濃度轉(zhuǎn)染®。48 小時(shí)后使用常規(guī)測定法測量熒光素酶表達(dá)。對照siRNA未觀察到抑制作用。
用 INTERFERin ®轉(zhuǎn)染靶向內(nèi)源性核纖層蛋白 A/C 的 1 nM siRNA顯著降低了核纖層蛋白基因表達(dá)至幾乎檢測不到的水平(圖 3)。
圖 3:用 INTERFERin ®轉(zhuǎn)染 1 nM siRNA導(dǎo)致高效和特異的基因沉默。使用 INTERFERin ®用 1 nM lamin A/C siRNA 轉(zhuǎn)染 CaSki 細(xì)胞。48 小時(shí)后,通過免疫熒光顯微鏡確定核纖層蛋白 A/C 的沉默效率。
1. Birmingham, A. et al., (2006) Nature Methods, Vol.3, No3, 199-204
2. Caffrey, D. et al., (2011) PLoS One。2011;6(7):e21503。電子版 2011 年 7 月 5 日。
microRNA (miRNA) 寡核苷酸的轉(zhuǎn)染越來越多地用于分析特定 miRNA 對細(xì)胞功能的生物學(xué)影響。INTERFERin ®是遞送miRNA、miRNA 模擬物或 pre-miRNA的試劑。
INTERFERin ®是最新一代的siRNA & miRNA 轉(zhuǎn)染試劑,專為在多種細(xì)胞中實(shí)現(xiàn)高轉(zhuǎn)染效率而設(shè)計(jì),從而實(shí)現(xiàn)高基因沉默或刺激基因表達(dá)。事實(shí)上,還已知一些 miRNA 通過與感興趣基因的啟動(dòng)子結(jié)合來誘導(dǎo)基因表達(dá)。例如,INTERFERin ®介導(dǎo)的 miR-373 遞送導(dǎo)致 E-鈣粘蛋白表達(dá)增加 3 倍(圖 4)。
圖 4:用 INTERFERin ®轉(zhuǎn)染 miR-373增強(qiáng)了 E-鈣粘蛋白的表達(dá)。將 PC-3 細(xì)胞接種在 6 孔板中并使用 miR-373 (25 nM) 轉(zhuǎn)染,每孔使用 8 µl INTERFERin ®。轉(zhuǎn)染后 72 小時(shí),通過 RT-qPCR 測定 E-cadherin mRNA 表達(dá)水平。該測定用HPRT-1基因表達(dá)標(biāo)準(zhǔn)化。
INTERFERin ®的陽離子成分只需要很少量的寡核苷酸,因此轉(zhuǎn)染過程溫和。此外,簡單而強(qiáng)大的協(xié)議確保了可重復(fù)的結(jié)果。可以用少量的 INTERFERin ®轉(zhuǎn)染像 miRNA 這樣的寡核苷酸,導(dǎo)致強(qiáng)烈的基因沉默或基因表達(dá)的刺激。無論使用何種濃度的 INTERFERin ®,其效果大致相同,使 INTERFERin ®成為一種經(jīng)濟(jì)的試劑。例如,使用不同體積的 INTERFERin ®的倍數(shù)變化始終在 1.5 和 1.8 之間(圖 5)。
圖 5:INTERFERin ®已經(jīng)在非常低的用量下有效。PC-3 細(xì)胞接種在 6 孔板中,并使用 miR-373 (10 nM) 轉(zhuǎn)染,每孔使用 4、6 或 8 µl INTERFERin ®。轉(zhuǎn)染后 72 小時(shí),通過蛋白質(zhì)印跡分析 E-鈣粘蛋白表達(dá)。使用β-肌動(dòng)蛋白表達(dá)對測定進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化。量化以控制情況為參考表示。
與高細(xì)胞活力相關(guān)的高轉(zhuǎn)染效率使 INTERFERin ® 成為為科學(xué)出版物生成相關(guān)數(shù)據(jù)的試劑。事實(shí)上, 自推出以來,使用 INTERFERin ®研究 miRNA 和 miRNA 相關(guān)分子的出版物數(shù)量呈指數(shù)增長(圖 6)。
圖 6:INTERFERin ®參與了越來越多關(guān)于 miRNA 轉(zhuǎn)染的出版物。
對于許多貼壁細(xì)胞系或原代細(xì)胞,1 nM siRNA 足以獲得 90% 以上的基因沉默。對于懸浮細(xì)胞系,使用 5 nM siRNA的 INTERFERin ®仍然可以達(dá)到 80% 的沉默(表 1)。
表 1:成功轉(zhuǎn)染的細(xì)胞系和使用 INTERFERin ®獲得的沉默效率。
我們的Polyplus 轉(zhuǎn)染數(shù)據(jù)庫中提供了各種細(xì)胞系的特定條件。
在細(xì)胞活力方面,INTERFERin ®優(yōu)于其他轉(zhuǎn)染試劑。用 1 nM siRNA 轉(zhuǎn)染 48 小時(shí)后,用 INTERFERin ®轉(zhuǎn)染的細(xì)胞看起來很健康,而用試劑 S 可以清楚地觀察到毒性(圖 7)。
圖 7:INTERFERin ®對細(xì)胞非常溫和,如使用 INTERFERin ®或競爭試劑轉(zhuǎn)染 siRNA 48 小時(shí)后的細(xì)胞形態(tài)比較所示。A549-GL3Luc 細(xì)胞在血清存在下使用 INTERFERin ®或競爭者 S 或 H 根據(jù)制造商的方案用 1 nM 熒光素酶 siRNA 轉(zhuǎn)染。
INTERFERin ®可以立即使用,并且協(xié)議簡單明了。1 nM siRNA 的起始濃度可確保大多數(shù)細(xì)胞類型中的大多數(shù)基因沉默(圖 8)。
INTERFERin ®是與血清和抗生素兼容,因此避免任何耗時(shí)洗滌和介質(zhì)變化; 此外,INTERFERin ®可以留在細(xì)胞上而不會(huì)產(chǎn)生任何不利影響。
圖 8:INTERFERin ®協(xié)議
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