jembio T4 DNA聚合酶
來源:大腸桿菌噬菌體T4
描述:
• 表現(xiàn)出 5'->3' 聚合酶和 3'->5' 核酸外切酶活性 (1, 2)。
• 將標記的核苷酸添加到 DNA 片段的凹陷 3' 末端。
• 聚合酶需要單鏈DNA 模板和引物。
• 核酸外切酶比在 DNA 聚合酶 I 中發(fā)現(xiàn)的更強,對單鏈 DNA 的活性比對雙鏈 DNA 的活性更高。
• 超純重組酶。
• 核酸外切酶活性可用于從雙鏈 DNA 的 3' 端去除一個或幾個核苷酸。
• 酶適用于:o 去除 3' 懸垂以形成鈍端 (3,4)o 5' 填充物以形成鈍端 (3,4)o 使用置換合成進行探針標記 (3,4)o 單鏈缺失亞克隆 (5)o 定點誘變中的第二鏈合成 (6)
單位定義:1
單位是在 37oC 下 30 分鐘內(nèi)催化 10 nmole 總核苷酸摻入酸不溶性產(chǎn)物中的酶量。
儲存條件:儲存于 –20oC。
儲存緩沖液:20 mM 磷酸鉀(pH 6.5)、5 mM 二硫蘇糖醇和 50% (v/v) 甘油。檢測條件:67 mM Tris-HCl(pH 8.8,22oC)、6.7 mM MgCl2、10 mM 二硫蘇糖醇、16.6 mM 硫酸銨、6.7 µM EDTA、20 µg 牛血清白蛋白、45 µg 活化小牛胸腺 DNA3 mM 3 mM C0 和 0。 、
dGTP、dTTP 和 [a-32P]dATP。在 100 µl 的反應(yīng)體積中,在 37oC 下孵育 30 分鐘 (1)。質(zhì)量控制:測試所有制劑的污染核酸內(nèi)切酶活性。
參考:
1. Goulian, M.、Lucas, ZJ 和 Kornberg, A. (1968) J. Biol?;瘜W 243, 627-638。
2. Lehman, IR (1981) 酶 14, 51-65。
3. Tabor, S. 和 Struhl, K (1989) 在 Current Protocols in Molecular Biology (Ausubel, FM, et al., eds) pp. 3.5.10-3.5.12, John Wiley&Sons, New York。
4. Sambrook, J.、Fritsch, EF 和 Maniatis, T. (1989) 分子克?。簩嶒炇沂謨?,第二版,第 5.44-5.47 頁,冷泉港。
5. Dale, R., McClure, B. 和 Houchins, J., (1985) Plasmid 13, 31-40。6. Kunkel, TA, Roberts, JD 和 Zakour, RA (1987) Methods Enzymol.154, 367-382。
T4 DNA 聚合酶是嗜中性聚合酶,表現(xiàn)出非常強的 3'->5' 核酸外切酶活性。
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