nordicmubio 10020500說明書
克隆 | K1 |
同種型 | IgG2a κ |
產(chǎn)品類別 | 單克隆抗體 |
單位 | 500 微克 |
主持人 | 老鼠 |
應(yīng)用 | ELISA 流式細胞術(shù) 免疫親和層析 免疫印跡 免疫細胞 化學(xué)免疫 組織化學(xué) |
背景
在過去十年中,我們的雙鏈 RNA (dsRNA) 抗體已被廣泛用于檢測和表征具有 dsRNA 基因組或中間體的動植物病毒。此外,抗 dsRNA 抗體可用作檢測病原體的診斷工具,包括在石蠟包埋的固定組織樣本中進行檢測(Richardson 等人,2010 年)。K1 單克隆抗體以與我們廣泛使用的 J2 抗體相似的親和力識別 dsRNA。可用于細胞和組織中dsRNA的組織學(xué)和細胞學(xué)檢測。事實證明,在 J2 不能提供令人滿意的結(jié)果的那些罕見的實驗設(shè)置中,它作為 J2 的替代品特別有用,以解決交叉反應(yīng)和/或去除不需要的背景。K1 可用于檢測多種病毒的 dsRNA 中間體,如肝炎病毒、泰勒氏鼠腦脊髓炎病毒或日本腦炎病毒。它用于檢測培養(yǎng)細胞和固定石蠟包埋的組織學(xué)樣品中的 dsRNA(參見出版物)。如果需要檢測 Poly I:C,我們會高度使用 K1 而不是 J2,因為 K1 對這種合成的聚核糖核苷酸具有更高的親和力(參見 Sch?nborn 等,1991,圖 2)。K1 已成功用于免疫熒光顯微鏡、流式細胞術(shù) (FACS) 和免疫捕獲方法(如斑點印跡和 ELISA)。我們需要高度使用 K1 而不是 J2 來檢測 C,因為 K1 對這種合成的多核糖核苷酸具有更高的親和力(參見 Sch?nborn 等,1991,圖 2)。K1 已成功用于免疫熒光顯微鏡、流式細胞術(shù) (FACS) 和免疫捕獲方法(如斑點印跡和 ELISA)。我們需要高度使用 K1 而不是 J2 來檢測 C,因為 K1 對這種合成的多核糖核苷酸具有更高的親和力(參見 Sch?nborn 等,1991,圖 2)。K1 已成功用于免疫熒光顯微鏡、流式細胞術(shù) (FACS) 和免疫捕獲方法(如斑點印跡和 ELISA)。
同義詞: Mouse anti dsRNA
來源
雌性 DBA/2 小鼠腹膜內(nèi)注射 50 ug L-dsRNA 和 75 ug 甲基化牛血清白蛋白的混合物,在*弗氏佐劑中乳化。在幾次加強后,脾細胞與 Sp2/0-Agl4 骨髓瘤細胞融合以產(chǎn)生雜交瘤克隆。
產(chǎn)品
mAb K1 可識別雙鏈 RNA (dsRNA),前提是螺旋長度大于或等于 40 bp。dsRNA 識別與抗原的序列和核苷酸組成無關(guān)。迄今為止研究的所有天然存在的 dsRNA(40-50 種)以及 poly(I).poly(C) 和 poly(A).poly(U) 都已被 K1 識別。正如 Sch?nborn 等人所述。K1 對 poly(I).poly(C) 的親和力高于對其他 dsRNA 抗原的親和力,盡管表觀結(jié)合常數(shù)的差異在不同的實驗條件下可能會有所不同。
配方: 凍干樣品應(yīng)使用 500 µl 無菌蒸餾水復(fù)溶。然后將 mAb 以 1 mgr/ml 的濃度存在于不含任何穩(wěn)定劑或防腐劑的 PBS 中。作為凍干程序的結(jié)果,重建的抗體可能含有少量聚集體形式的變性蛋白質(zhì),這可能會干擾某些應(yīng)用,例如免疫組織化學(xué)(例如,通過提供高背景)。因此,我們強烈建議在使用和使用上清液之前對重組的抗體進行離心(微量離心)。
純化方法: A蛋白-瓊脂糖親和層析。
純度: 凝膠電泳純 IgG 抗體。
濃度: 重構(gòu)后的濃度:通過 A280 nm 確定為 1.00 mg/ml(A280 nm = 1.47 對應(yīng)于 1 mg/ml 抗體)。
應(yīng)用
MAb K1 可用于 ELISA、dsRNA 免疫印跡、免疫親和層析,在某些系統(tǒng)中還可用于免疫組織化學(xué)(參見參考資料)。對于任何特定應(yīng)用,抗體的最佳工作稀釋度應(yīng)通過滴定確定。請注意,dsRNA 免疫印跡之前的核酸分離必須通過聚丙烯酰胺凝膠電泳進行,因為從瓊脂糖凝膠印跡后檢測的靈敏度要低得多。不得用于臨床目的。僅供體外使用。
儲存
重構(gòu)后的抗體應(yīng)分裝并儲存在 -20 °C 或 -70 °C。加入 10 mM 疊氮化納后,未稀釋的抗體也可以在 +4 °C 下短時間保存。對于長期儲存,mAb 應(yīng)保持冷凍。應(yīng)避免重復(fù)冷凍/解凍循環(huán)。當(dāng)保持凍干時,產(chǎn)品在 -20°C 或 -70°C 下可保持穩(wěn)定 10 年。
運輸條件: 在環(huán)境溫度下運輸。
注意
本產(chǎn)品僅供研究和體外測試使用,不適用于涉及人類或動物的診斷或治療程序。它可能含有危險成分。請參閱安全數(shù)據(jù)表 (SDS) 了解更多信息和正確處理程序。根據(jù)當(dāng)?shù)胤ㄒ?guī)處理產(chǎn)品殘余物。本數(shù)據(jù)表在合理范圍內(nèi)盡可能準確,但 Exalpha Biologicals 對本信息中的任何不準確或遺漏不承擔(dān)任何責(zé)任。
參考
1) Sch?nborn, J.、Oberstrass, J.、Breyel, E.、Tittgen, J.、Schumacher, J. 和 Lukacs, N. (1991) 雙鏈 RNA 的單克隆抗體作為粗核酸中 RNA 結(jié)構(gòu)的探針提取物。核酸研究 19,2993-3000。2) Lukacs, N. (1994) 通過雙鏈 RNA 的單克隆抗體檢測植物中的病毒感染和區(qū)分共存病毒。J. 維羅爾。方法 47, 255-272。3) Lukacs, N. (1997) 通過結(jié)構(gòu)特異性抗 RNA 抗體檢測有義:反義雙鏈體。在:反義技術(shù)。實用方法,C. Lichtenstein 和 W. Nellen(編輯),第 281-295 頁。IRL 出版社,牛津。4) SJ Richardson、A. Willcox、DA Hilton、S. Tauriainen、H. Hyoty、AJ Bone、AK Foulis、NG Morgan。使用針對 dsRNA 的抗血清檢測福爾馬林固定石蠟包埋組織中的病毒感染。J 臨床病毒。(2010) 49(3); 180-5。doi:10.1016/j.jcv.2010.07.015。
圖 1. K1 抗體用于檢測經(jīng) poly I:C 處理的 MEF 中的 dsRNA(下圖)。dsRNA 的存在伴隨著 eIF2a 的磷酸化,從而導(dǎo)致蛋白質(zhì)合成停滯(上圖)。圖取自 Clavarino 等人 (2012) P |
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