immaginabiotech AHARIBO 6 RXN簡(jiǎn)介

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請(qǐng)注意，AHARIBO 將在 +4°C 時(shí)分裝在兩個(gè)單獨(dú)的盒子中運(yùn)輸。

常見問題解答：

我可以在動(dòng)物模型中使用AHARIBO嗎？

不，AHARIBO致力于細(xì)胞培養(yǎng)。AHA與新生肽的結(jié)合對(duì)該方案至關(guān)重要。盡管原則上可以在活體動(dòng)物中加入AHA（Sarah Calve et al.Sci Rep.2016；6:32377）在這個(gè)階段，我們不建議在動(dòng)物或活生物體中研究AHARIBO。

我不小心把珠子凍住了，我還能用嗎？

對(duì)通常，不建議凍結(jié)珠子，但不應(yīng)影響珠子的特性。

在繼續(xù)溶解之前，我需要用sBlock處理細(xì)胞嗎？

是的，必須將sBlock添加到細(xì)胞中，以阻止翻譯，并將新生肽固定在核糖體上，這是AHARIBO的關(guān)鍵步驟。sBlock也存在于試劑盒中的裂解緩沖液（LB）和W緩沖液（WB）中。如果錯(cuò)誤地跳過細(xì)胞與sBlock的孵育，裂解緩沖液中的sBlock將穩(wěn)定核糖體上的新生肽。

我應(yīng)該如何儲(chǔ)存用于AHARIBO實(shí)驗(yàn)的裂解物？

我們建議在80°C至80°C的溫度下儲(chǔ)存，最多1個(gè)月。

我沒有足夠的時(shí)間在一天內(nèi)完成所有步驟。我可以存儲(chǔ)功能化珠子（在步驟1之后）并稍后繼續(xù)嗎？

是的，你可以在第一步停下來。我們建議將珠子保持在+4°C過夜。不要冷凍珠子。

可以使用什么樣的輸入材料？

我們建議從對(duì)應(yīng)于0.2 a.u.（260 nm）的總體積的裂解液開始。另一方面，我們測(cè)試了AHARIBO RNA，HeLa裂解物吸光度降至0.002 a.u.我如何計(jì)算吸光度？

您只需在260 nm處以溶解緩沖液為空白測(cè)量納米滴處的溶解液，并使用該吸光度值計(jì)算所需的體積。一個(gè)實(shí)際的例子是，如果你的裂解液的吸光度（A260）對(duì)應(yīng)于10，這意味著你有10個(gè)A.u./mL，然后對(duì)應(yīng)于0.01 A.u./µL。因此，如果你想從0.2 A.u開始，需要20µL的裂解液。

在AHARIBO試劑盒中處理之前，有沒有辦法改進(jìn)我的樣品？

可以使用標(biāo)準(zhǔn)方案清潔樣品，以減少細(xì)胞裂解物。這將去除全長(zhǎng)合成蛋白質(zhì)，豐富含有新生鏈的核糖體部分。

我可以為哪一種物種使用AHARIBO？

一般來說，AHARIBO在真核核糖體上效果良好，但到今天為止，它已在哺乳動(dòng)物細(xì)胞和小鼠體內(nèi)得到驗(yàn)證。sBlock是真核生物*的翻譯抑制，不適用于原核生物。