AssayQuant 的PhosphoSens ® 技術(shù)構(gòu)成了其廣泛的 400 多種*的酶和抑制劑檢測(cè)產(chǎn)品組合的基礎(chǔ)。每種檢測(cè)都具有以試劑盒或散裝傳感器肽形式提供的新型傳感器肽底物,并且作為相關(guān)的獨(dú)立試劑家族,每個(gè)成分都經(jīng)過仔細(xì)測(cè)試,以確保其經(jīng)過優(yōu)化以用于適用的檢測(cè)。散裝試劑以折扣價(jià)提供,適用于高通量或大容量應(yīng)用。
我們提供兩種檢測(cè)形式:連續(xù)和終點(diǎn)/紅色。兩種格式都與 96、384 和 1536 孔板兼容,并產(chǎn)生與測(cè)量時(shí)反應(yīng)混合物中磷酸化產(chǎn)物的量成正比的信號(hào)。在這兩種情況下,效力結(jié)果均與基于細(xì)胞的檢測(cè)結(jié)果一致,加速并改進(jìn)了先導(dǎo)識(shí)別、表征、分析和優(yōu)化研究,從而有可能更快地開發(fā)出更有效的藥物。
兩種分析形式都與廣泛的 ATP 濃度(包括低至生理 [mM] 水平)*兼容,并使用生理 Mg ++、 Mn ++、 Ca ++離子濃度和源自已知底物的肽序列。使用我們的選擇性 PhosphoSens 底物,可以使用粗制細(xì)胞或組織裂解物進(jìn)行檢測(cè),提供更多生理環(huán)境,包括測(cè)量活細(xì)胞中形成的功能性復(fù)合物中激酶的活性。
貨號(hào) | 品名 | 規(guī)格 | 品牌 |
CSKS-AQT0101 | PhosphoSens Kit | 1mg | AssayQuant |
CSKS-AQT0734 | BULK Cysteine Sox Kinase Sensor, AQT0734 , Peptide substrate, 1mg net lyophilized | 1mg | AssayQuant |
CSKS-AQT0157 | PEPTIDE SUBSTRATE | 1mg | AssayQuant |
AQT0449 | PhosphoSensKit | 1mg | AssayQuant |
AQT0733 | PhosphoSensKit | 1mg | AssayQuant |
AQT0255B | PEPTIDE SUBSTRATE | 1mg | AssayQuant |
CSKS-AQT0296B | BULK Cysteine Sox Kinase Sensor, AQT0296, Peptide substrate, 1mg net lyophilized | 1mg | AssayQuant |
CSKS-AQT0258B | PEPTIDE SUBSTRATE | 1mg | AssayQuant |
CSKS-AQT0297B | PEPTIDE SUBSTRATE | 1mg | AssayQuant |
CSKS-AQT0104 | PEPTIDE SUBSTRATE | 1mg | AssayQuant |
AQT0691 | PLK1 | 1mg | AssayQuant |
AQT0515 | Cysteine Sox Kinase Sensor | 1mg | AssayQuant |
AQT0536 | PhosphoSensKit | 1mg | AssayQuant |
AQT0297 | PhosphoSensKit | 1mg | AssayQuant |
AQT0258 | PhosphoSensKit | 1mg | AssayQuant |
AQT0001 | PhosphoSensKit | 1mg | AssayQuant |
AQT50 | 50mM(50*)Europium | 15ml | AssayQuant |
CSKS-AQT0255B | BULK Cysteine Sox Kinase Sensor, AQT0255, Peptide substrate, 1mg net lyophilized | 1mg | AssayQuant |
CSKS-AQT0459B | BULK Cysteine Sox Kinase Sensor, AQT0459 , Peptide substrate, 1mg net lyophilized | 1mg | AssayQuant |
PhosphoSens 連續(xù)測(cè)定利用簡單的添加和讀取協(xié)議,提供實(shí)時(shí)動(dòng)態(tài)測(cè)量的能力,以及直接的熒光強(qiáng)度測(cè)量。這些測(cè)定通過允許測(cè)量初始反應(yīng)速率(測(cè)量為初始線性區(qū)域的斜率)來提供高準(zhǔn)確度和精確度,通常在前 30-60 分鐘內(nèi)并包括許多數(shù)據(jù)點(diǎn),每 30 秒到 2 分鐘執(zhí)行一次讀數(shù). 這種連續(xù)測(cè)定形式還允許校正化合物自發(fā)熒光,因?yàn)榇吮尘靶盘?hào)不會(huì)隨時(shí)間而變化,并且可以通過從總熒光(包括酶在內(nèi)的所有成分)中減去背景信號(hào)(包括化合物和反應(yīng)的所有成分)來校正,以確定每個(gè)時(shí)間點(diǎn)的凈信號(hào). 連續(xù)格式基本上與任何市售的能夠進(jìn)行動(dòng)力學(xué)讀數(shù)的熒光酶標(biāo)儀以及相關(guān)的實(shí)驗(yàn)室自動(dòng)化設(shè)備兼容。不需要停止溶液或淬火/顯影步驟,最大限度地減少時(shí)間,同時(shí)最大限度地提高產(chǎn)量。
由于許多化合物庫都包含自發(fā)熒光化合物,AssayQuant 提供的 PhosphoSens Red 分析允許在更長(>600 nm)波長下進(jìn)行檢測(cè),具有相同的最大激發(fā),并使用時(shí)間分辨熒光。我們建議在發(fā)射波長處使用 100 µs 的激發(fā)和檢測(cè)延遲,采集時(shí)間為 300 µs,以避免來自反應(yīng)混合物中熒光材料的信號(hào)污染,這些材料的壽命非常短(納秒)。我們的終點(diǎn)檢測(cè)使用與我們的連續(xù)檢測(cè)相同的反應(yīng)設(shè)置,一旦反應(yīng)運(yùn)行,將向每個(gè)孔中添加基于銪離子 (Eu 3+ ) 的試劑,以取代 Mg ++在螯合復(fù)合物中。Sox 熒光團(tuán)的激發(fā)使銪發(fā)光敏感,產(chǎn)生最大 615 nm(紅色)的光,可以使用標(biāo)準(zhǔn)濾光片進(jìn)行測(cè)量。PhosphoSens Red 檢測(cè)通常可以使用與連續(xù)格式相同的 PhosphoSens 底物。然而,一些高酸性底物(例如,那些常用于酪氨酸激酶的底物)可能會(huì)導(dǎo)致紅色格式的低信噪比。為了解決這種情況,我們已經(jīng)確定了替代傳感器肽序列,這些序列允許優(yōu)化 PhosphoSens Red 測(cè)定,信號(hào)與背景比為 2 或更高,提供 0.7 或更高的 Z' 值(0.5 被認(rèn)為是好的)。在這些情況下,相同的序列可用于連續(xù)格式,
除了我們的連續(xù)和終點(diǎn)/紅酶和抑制劑活性檢測(cè)外,AssayQuant 還提供三種不同酶家族的檢測(cè):蛋白激酶、蛋白磷酸酶和脂質(zhì)激酶。如我們的技術(shù)頁面所述,所有 AssayQuant 蛋白激酶和磷酸酶測(cè)定均基于使用基于熒光傳感器肽的底物。使用脂質(zhì) (DAG) 底物的脂質(zhì)激酶(二?;视图っ富?DGK)目前僅作為 AssayQuant測(cè)試服務(wù)的一部分提供。
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