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?genaxxon M3009.0250說明書

更新時(shí)間:2022-09-27      點(diǎn)擊次數(shù):628

genaxxon M3009.0250說明書

SNP Pol DNA-Polymerase

貨號(hào): M3009.0250

運(yùn)輸:濕冰運(yùn)輸,-20°C 儲(chǔ)存

 

產(chǎn)品信息“SNP Pol DNA 聚合酶”

SNP Pol DNA 聚合酶可輕松、可靠和快速地特異性區(qū)分等位基因,例如 B. 使用 CRISPR/Cas9 設(shè)定點(diǎn)突變,檢測(cè)錯(cuò)誤的 CRISPR/Cas9 產(chǎn)品或驗(yàn)證測(cè)序結(jié)果。SNP Pol DNA 聚合酶高度特異性地識(shí)別引物-模板復(fù)合物是否錯(cuò)配。錯(cuò)配(點(diǎn)突變)必須位于引物的 3' 端。因此,突變等位基因可以與野生型等位基因*區(qū)分開來——無需測(cè)序,因?yàn)榫酆厦冈阱e(cuò)配的情況下根本不會(huì)擴(kuò)增。

只需將引物放在假定的點(diǎn)突變上(重要提示:點(diǎn)突變必須位于 3' 末端),聚合酶將以 * 的準(zhǔn)確度檢測(cè)該區(qū)域的錯(cuò)配:如果堿基與引物的 3' 末端互補(bǔ)在 DNA 上 - 鏈顯示突變而引物沒有,則不會(huì)發(fā)生擴(kuò)增 - 快速 * 確定!
因此,SNP Pol DNA 聚合酶可用于以簡(jiǎn)單、省時(shí)且經(jīng)濟(jì)高效的方式篩選點(diǎn)突變。

變體SNP PolTaq DNA 聚合酶 >具有 5'-3' 核酸酶活性,因此可以與特定的引物探針一起使用,例如 Taqman® 探針或分子信標(biāo)。

以*提供一次性測(cè)試樣品。在德國(guó)境內(nèi)運(yùn)送時(shí)無運(yùn)費(fèi)!測(cè)試樣品價(jià)格將在產(chǎn)品正式訂購時(shí)退還。

描述
SNP Pol DNA 聚合酶(單核苷酸的高區(qū)分度)) 是一種高度選擇性的 DNA 聚合酶。專為等位基因特異性鑒別而開發(fā),需要非常高的鑒別率(high discriction):例如用于等位基因特異性PCR(ASA;AS-PCR)、等位基因特異性引物延伸(AS-PEX)、SNP分析、基因分型或甲基化特異性 PCR (MSP)。許多 DNA 聚合酶耐受錯(cuò)配的引物-模板復(fù)合物。另一方面,SNP Pol DNA 聚合酶可以特異性地區(qū)分它們(高度區(qū)分),并且只提供具有匹配引物對(duì)的靶向 PCR 產(chǎn)物!Genaxxon SNP Pol 和 SNP PolTaq DNA 聚合酶使用等位基因特異性 PCR 可以高達(dá) * 區(qū)分兩個(gè)等位基因,并且在簡(jiǎn)單的 qPCR 之后,可以清楚地說明存在哪些等位基因。

使用等位基因特異性 PCR,可以量化野生型序列池或背景中的突變率。NGS確定的突變頻率也可以使用等位基因特異性 PCR 和 SNP Pol DNA 聚合酶進(jìn)行驗(yàn)證。SNP PolTaq DNA 聚合酶非常適合分析液體活檢樣本。有了它,可以很好地分析和量化癌癥突變的存在和頻率。

圖片: SNP Pol DNA聚合酶的應(yīng)用實(shí)例

HiDi DNA 聚合酶的應(yīng)用說明

我們建議使用短擴(kuò)增子(約 60-200 bp)的引物以獲得最佳結(jié)果。更長(zhǎng)的擴(kuò)增子也是可能的。
在較長(zhǎng)的擴(kuò)增子 >500 bp 的情況下,可能需要添加鎂 (+0.5 - 1.5mM)。

故障排除:
PCR 30 個(gè)循環(huán)后沒有條帶!
缺失或弱波段情況下的優(yōu)化過程

- 實(shí)時(shí) PCR 方法
- 檢查 dNTP 濃度。這應(yīng)該在 200 到 300 µM 之間(在 PCR 中)。
- 增加循環(huán)次數(shù)(至少 35,最好等于 40)

測(cè)試優(yōu)化 -
循環(huán)次數(shù) 在終點(diǎn)檢測(cè)中,30 次循環(huán)并不總是足以生成清晰可見的條帶。例如,如果基線少于 200 個(gè) DNA 拷貝。因此,測(cè)試應(yīng)使用實(shí)時(shí) PCR 運(yùn)行,或設(shè)置五個(gè)平行 PCR,其中一個(gè)在五個(gè)不同循環(huán)后從 PCR 設(shè)備中移除(示例如下)。

終點(diǎn)檢測(cè):
與 SNP Pol DNA 聚合酶平行設(shè)置五個(gè)相同的 PCR 反應(yīng)。
在 20、25、30、35 和 40 個(gè)循環(huán)時(shí),從循環(huán)儀中取出一個(gè) PCR 管,最后將所有五個(gè)反應(yīng)加載到瓊脂糖凝膠上。
這可以很容易地查看針對(duì)給定應(yīng)用(起始材料、目標(biāo)、引物)的 PCR 中的最佳循環(huán)數(shù)。

使用細(xì)胞裂解物的 SNP Pol PCR
動(dòng)物細(xì)胞和大腸桿菌可直接用于使用 SNP Pol DNA 聚合酶的 PCR!不需要單獨(dú)的裂解或蛋白酶 K 消化。
程序 PCR 方法:

1. 每批 PCR 需要 50 - 500 個(gè)細(xì)胞!
2. 用引物和緩沖液制備 PCR 混合物并放在冰上!
3. 將挑取的菌落直接放入 10-20µL 水中(無需單獨(dú)裂解,無需蛋白酶 K 消化),
短暫渦旋(5 秒),然后將此細(xì)胞懸液直接加入 PCR 反應(yīng)混合物中,例如
用于 PCR 的 10µL 細(xì)胞懸液 -接近 20µL 總體積。初始變性時(shí)間2-3分鐘
即可,必要時(shí)可延長(zhǎng)至5分鐘。
每個(gè)反應(yīng)最多 100 個(gè)拷貝的基因組 DNA 相對(duì)較低,但應(yīng)該仍然有效。
這種細(xì)胞懸液的其余部分也可以冷凍起來進(jìn)行進(jìn)一步測(cè)試。

可選:
4. 如果可能:進(jìn)行實(shí)時(shí) PCR!

SNP Pol DNA 聚合酶(M3009 >)或(M3061 >)可與非特異性熒光染料(例如來自 Genaxxon 或 SybrGreen® 的Green DNA Dye >)一起用于實(shí)時(shí) PCR。當(dāng)使用特定的 PCR 探針時(shí),只能使用 SNP PolTaq DNA 聚合酶,因?yàn)橹挥兴哂?5'-3' 外切核酸酶活性。

憑借我們的高品質(zhì)dNTP 作為一組(M3015.4100 和 M3015.0250)>或作為混合物(M3016.1010)>或我們的DNA 標(biāo)記 >和我們廉價(jià)的標(biāo)準(zhǔn)瓊脂糖 >我們?yōu)槟峁└嘤糜?PCR 的產(chǎn)品。

SNP Pol DNA 聚合酶的應(yīng)用領(lǐng)域
- 點(diǎn)突變的監(jiān)測(cè)、驗(yàn)證和檢測(cè)
- 識(shí)別正確或錯(cuò)誤的 CRISPR/Cas9 產(chǎn)品
- 測(cè)序結(jié)果的驗(yàn)證/驗(yàn)證
- 突變的量化(例如 NGS 結(jié)果)
- 通過等位基因檢測(cè) SNP-特異性擴(kuò)增 (ASA) / 等位基因特異性 PCR
- 亞硫酸氫鹽處理的 DNA(CpG 甲基化側(cè))后的甲基化特異性 PCR (MSP)
- HLA 基因分型
- 微測(cè)序
- 使用水解探針的實(shí)時(shí) PCR
- 實(shí)時(shí)多重 PCR

-秀麗隱桿線蟲中的 DamID-seq 數(shù)據(jù)。

Sharma R、Ritler D、Meister P.
秀麗隱桿線蟲發(fā)育過程中核組織 DNA 腺嘌呤甲基轉(zhuǎn)移酶鑒定分析工具。創(chuàng)世紀(jì)。2016 年 2 月 4 日。doi:10.1002/dvg.22925。

- 使用 SNPase DNA 聚合酶進(jìn)行微測(cè)序 SNP 基因分型可以通過以下所述的程序進(jìn)行:

Lovmar L、Fredriksson M、Liljedahl U、Sigurdsson S、Syvänen AC。
通過微測(cè)序和微陣列進(jìn)行的定量評(píng)估揭示了全基因組擴(kuò)增 DNA 的準(zhǔn)確多重 SNP 基因分型。核酸研究 2003;31:e129 。

- HiDi DNA 聚合酶的等位基因特異性錯(cuò)配選擇性

Drum M、Kranaster R、Ewald C、Blasczyk R、Marx A (2014) 水生棲熱菌 DNA 聚合酶的變體在等位基因和甲基化特異性擴(kuò)增中的應(yīng)用具有更高的選擇性。公共科學(xué)圖書館一號(hào) 9(5):e96640。doi:10.1371/journal.pone.0096640

 

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