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核酸電泳染料(紫外光型)——天凈沙

更新時(shí)間:2023-01-17      點(diǎn)擊次數(shù):1475

CAT#:220117-1.5

常溫運(yùn)輸4℃保存

核酸電泳染料(紫外光型)


產(chǎn)品及特點(diǎn)

目前最常見的替代EB的核酸染料SYBR Green I(屬于花氰類染料雖然毒性比EB低、靈敏度比EB高,但由于其化學(xué)穩(wěn)定性差(怕光、怕水、怕熱),實(shí)驗(yàn)結(jié)果的重復(fù)性差;此外,SYBR Green I在電泳過程中能在DNA分子間移位,使DNA條帶模糊和扭曲,使得電泳清晰度和分辨率不如EB。所以在實(shí)際應(yīng)用中依然不能有效替代EB。本產(chǎn)品是同時(shí)具有EB穩(wěn)定性和SYBR Green I低毒性的新性核酸染料,其特點(diǎn)如下:

1. 低毒。其主要成分未發(fā)現(xiàn)對人體有致癌性、未被列入有毒有害品,有利于保護(hù)使用者的健康和保護(hù)日益惡化的環(huán)境。

2. 靈敏。檢測靈敏度跟EB相當(dāng),能滿足常規(guī)核酸電泳實(shí)驗(yàn)要求。

3. 穩(wěn)定。對光、水和熱的穩(wěn)定性跟EB相當(dāng),可加入瓊脂糖凝膠中反復(fù)熔化。

4. 無分子間位移現(xiàn)象。不會(huì)出現(xiàn)SYBR染料常見的條帶模糊和扭曲現(xiàn)象。

5. 使用方法多樣。既可以加入熔化的膠中,也可以電泳后染色,還可用于PAGE。

6. 跟各種常用的核酸電泳緩沖液(如TBE、TAE)兼容,但在TBE中背景低。

7. 觀察時(shí)可以使用現(xiàn)成的觀察EB的300nm UV紫外儀。

8. 既可用用于DNA電泳染色,也可用于RNA電泳染色。

DNA或RNA濃度較高時(shí)還可以直接在日光下觀察(需要將膠放在黑色背景下)。由于避免了UV對DNA的傷害,尤其適用于膠回收實(shí)驗(yàn)。 



規(guī)格及成分

號(hào)

規(guī)格

包裝材料

核酸電泳染料(紫外線型)

220117

1.5 mL

1.5mL棕色管

使用手冊

220117sc

1份

運(yùn)輸及保存:

常溫運(yùn)輸,4保存,有效期一年

自備試劑:

電泳緩沖液和瓊脂糖凝膠

使用方法:

注意:雖然本產(chǎn)品的主要成分未發(fā)現(xiàn)對人體有致癌性、未被列入有毒有害品,但操作時(shí)最好還是戴上塑料手套。

使用方法之一:電泳中染色DNA(RNA的染色跟DNA一樣)。

本方法是將本產(chǎn)品直接加入溶化的凝膠中使用,只適用于瓊脂糖凝膠電泳,不適用于PAGE。

1. 將本產(chǎn)品直接加入到融化的瓊脂糖凝膠中,每100mL凝膠加5 uL本產(chǎn)品(如果用TBE緩沖液)或電泳染色,混合均勻后倒膠。瓊脂糖凝膠中不能含任何其他染料(如EB和SYBR Green I,否則會(huì)相互干擾。注意:一定要保證瓊脂糖熔化,尤其是在第一次熔化膠的時(shí)候,否則未熔化的小顆粒將產(chǎn)生跟染料相同的熒光。

       2.將DNA樣品與DNA上樣液按比例混合后上樣。注意:一定要使用不含SDS等去污劑的上樣液,否則SDS會(huì)跟染料結(jié)合,極大地降低靈敏度。

3. 上樣后電泳,電泳參數(shù)同常規(guī)的電泳。

4. 電泳結(jié)束后在300 nm左右 的UV下觀察。注意:不要使用波長為260 nm或360 nm的UV,否則檢測靈敏度會(huì)降低。如果DNA或RNA濃度較高,還可以直接在日光下直接觀察(需要將膠放在黑色背景下),避免UV對DNA的傷害,尤其適用于膠回收實(shí)驗(yàn)。

注:顯色結(jié)果:在紫外下,DNA濃度非常高的時(shí)候是白色,濃度低的時(shí)候是綠色的,單鏈核酸有時(shí)是紅色的

使用方法之二:電泳后染色DNA

本方法是在電泳后對DNA進(jìn)行染色,適用于瓊脂糖凝膠電泳和PAGE。但該方法需要單獨(dú)的染色處理,染料用量較大,不推薦用于瓊脂糖凝膠的染色。

1. 按照常規(guī)方法進(jìn)行電泳。

2. 用去離子水將本產(chǎn)品稀釋500倍后(100 mL水需要加0.2 mL 本產(chǎn)品,將凝膠放入,室溫下?lián)u晃染色30分鐘(對瓊脂糖凝膠)或15分鐘(對PAGE)。

3. 用水脫色10-30分鐘,具體時(shí)間需根據(jù)背景強(qiáng)弱決定,其余同方法一。

注意:電泳后染色液可以反復(fù)使用次數(shù)。

疑難解答

Q:本產(chǎn)品可否用于RNA染色?

A: 可以,不論RNA是在甲醛變性膠中電泳,還是在普通的TBE或TAE膠中電泳,RNA染色后在300nm下都跟DNA一樣呈綠色,

Q:本產(chǎn)品是否可以加入上樣液中進(jìn)行染色?

A:不行,本產(chǎn)品只能直接加入凝膠中進(jìn)行染色或電泳后再染色。

Q:為何前端(靠近正極)的DNA條帶很淡或根本看不見?

A:跟EB一樣,電泳時(shí)本產(chǎn)品朝負(fù)極方向移動(dòng),當(dāng)前端的DNA(最小片段)進(jìn)入沒有本產(chǎn)品的區(qū)域時(shí),已經(jīng)結(jié)合的染料分子會(huì)逐漸從DNA分子上脫落,所以條帶會(huì)變淡或根本看不見。解決辦法之一是縮短電泳時(shí)間或電泳后再染色;之二是在每100 mL電泳緩沖液中補(bǔ)加3-5uL染料。

Q:本產(chǎn)品在哪種緩沖液中效果好?

A: TBE中效果好。如果使用TAE 100mL膠中加3-5 uL本產(chǎn)品就可以。

Q: 為何電泳后前面部分(靠近正極)的膠呈白色,后面的膠呈黑色?

A: 本產(chǎn)品帶正電,電泳時(shí)往上走,膠的黑色部分是染料上移后留下的無染料膠。本產(chǎn)品在TAE中背景強(qiáng),可參考上個(gè)問題答案更換電泳液以降低背景值。

Q:用SYBR染色的DNA在電泳時(shí)為何容易發(fā)生條帶模糊和扭曲現(xiàn)象?

A:SYBR染料一般與DNA的小溝結(jié)合,但在常規(guī)電泳條件下該結(jié)合并不牢固,染料分子可以在標(biāo)記的和未標(biāo)記的DNA分子之間轉(zhuǎn)移,使DNA分子的泳動(dòng)速度時(shí)快(無染料結(jié)合時(shí))時(shí)慢(有染料結(jié)合時(shí)),發(fā)生條帶模糊和扭曲現(xiàn)象。嵌入型染料(如EB和本產(chǎn)品)與DNA結(jié)合牢固,則無此現(xiàn)象。

Q:核酸染料是否都有毒性?

A:核酸染料對動(dòng)物和人的毒性由多方面決定。一是染料的膜通透性,EB被歸類為強(qiáng)誘變劑是由于其分子量較小,容易進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)。而EB二聚體Ethidium HomodimerEthD嵌入DNA的能力比EB強(qiáng)上千倍,但毒性很小,就是由于其分子比EB大,不能透過細(xì)胞膜,所以毒性反而更低。SYBR系列染料雖然低毒,但由于一般都溶于DMSO(因?yàn)槿菀姿猓荒苁褂盟芤鹤鋈軇┲?,所以如果濺到皮膚表面,更容易進(jìn)入皮膚。二是染料是否容易被人體降解。比如EB在體外就很難降解,一旦進(jìn)入體內(nèi)能在人體內(nèi)殘留的時(shí)間可能比較長,增加了毒性;而SYBR Green I等染料(也能以嵌入方式與DNA結(jié)合)由于不穩(wěn)定,比較容易自然降解,所以毒性自然較低。三是降解產(chǎn)物是否有毒性,比如用很多方法(如強(qiáng)堿法)降解EB得到的產(chǎn)物有的比EB毒性更大,而有的染料降解產(chǎn)物毒性卻低很多,甚至無毒。四是染料進(jìn)入細(xì)胞核以后是否能跟DNA結(jié)合,很多實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示即使EB染料也很難嵌入型到染色體中,因?yàn)槿旧w中的DNA已經(jīng)緊密地與各種組蛋白結(jié)合。五是細(xì)胞修復(fù)突變的能力,正常人體都有很強(qiáng)的修復(fù)突變的能力,如修復(fù)日光中UV誘導(dǎo)的DNA突變??傊?,一種DNA染料的毒性強(qiáng)弱是多種因素綜合的結(jié)果。

關(guān)聯(lián)產(chǎn)品

核酸電泳染料(可見光型)











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