重組豬源RNase抑制劑說明書
上海起發(fā)生物科技有限公司(Shanghai BioHub Biotechnology Co., Ltd.)屬于上海起發(fā)實驗試劑有限公司(2009年成立)旗下的子公司,成立的初衷是建立上海起發(fā)生物自有品牌,打造優(yōu)質(zhì)的生物試劑民族自有品牌。降低成本的同時,把好生物產(chǎn)業(yè)鏈中的國產(chǎn)生物試劑品質(zhì)關(guān)。未來讓每一個和我們一樣擁有民族情懷的企業(yè),共同創(chuàng)世界優(yōu)秀的中國生物制造企業(yè),圓夢中國。
產(chǎn)品詳情
貨號 | 規(guī)格 | 價格 |
78BAB10003-100uL | 100uL(4KU) | ¥200.00 |
78BAB10003-1ml | 1ml (40KU) | ¥1600.00 |
78BAB10003-50ml | 50ml (2MU) | ¥50000.00 |
產(chǎn)品描述
本產(chǎn)品是以大腸桿菌中進(jìn)行表達(dá),并通過親和層析純化的重組豬源RNase抑制劑,該蛋白特征與豬肝和人胎盤來源此類酶相似,可替代天然提取 RNase Inhibitor的應(yīng)用。本產(chǎn)品與RNase A形成1: 1復(fù)合體,抑制RNase活性。該反應(yīng)是可逆的,通過尿素及巰基類試劑能夠解離復(fù)合體,使RNase復(fù)性而抑制劑不可逆失活。本產(chǎn)品與其它競爭性抑制劑(核酸類,無機磷酸類)不同,可以很容易地通過苯酚處理將其從反應(yīng)體系中除去,但不能抑制逆轉(zhuǎn)錄酶的RNase H的活性。使用時可直接加入含有RNA的反應(yīng)液中用于cDNA第一鏈合成、體外轉(zhuǎn)錄和體外翻譯等實驗。
產(chǎn)品特點
· cDNA合成
· 體外轉(zhuǎn)錄
· 體外翻譯
· 1-Step RT-qPCR
產(chǎn)品組分
緩沖液成分:20 mM HEPES-KOH(pH 7.6),50mM KCl,8mM DTT,50% (v/v) glycerol。
使用方法
使用方法
溫馨提示:需要用無RNA酶的PCR管中配制RNA/引物預(yù)混液
1 cDNA合成
(1)在無RNA酶的PCR管中配制RNA/引物預(yù)混液
組分 | 反應(yīng)體積(10ul) |
Oligo(dT)20 (或Random primer) (或基因特異引物) | 25pmoles (25pmoles) (5pmoles) |
10mM dNTPs | 2µL |
模板RNA | 2pg-5µg |
DNase/Rnase Free Water | 10ul |
(2)65℃加熱5min,立即置于冰上
組分 | 反應(yīng)體積(10ul) |
RNA引物預(yù)混液 | 10ul |
5x RT Buffer | 4µL |
BIOHUB Reverse Transcritase | 1ul |
RNase inhibitor(40U/µL) | 1ul |
100mM DTT | 2ul |
DNase/Rnase Free Water | 補足20ul |
(3)輕輕混勻,按如下反應(yīng)條件設(shè)置
逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)條件 | ||
1 | 42℃ | 20-60min |
2 | 99℃ | 5min |
備注:逆轉(zhuǎn)錄溫度可在42-60℃之間調(diào)整,反應(yīng)時間建議在20-60min內(nèi)調(diào)整
(4)得到的cDNA溶液可以直接用于第二鏈cDNA合成及后續(xù)PCR反應(yīng)。
優(yōu)化參考方法
優(yōu)化參數(shù) | 參考范圍 |
逆轉(zhuǎn)錄 | 50-60℃ 5-15min |
預(yù)變性溫度時間 | 95-98℃ 10sec-5min |
變性溫度 | 95-98℃ 3sec-10sec |
延伸/退火溫度 | 60-65℃ 5sec-30sec |
注意事項
1. 本產(chǎn)品在PH7?8時表現(xiàn)最佳抑制RNase活性。
2. 本產(chǎn)品發(fā)揮活性作用至少添加1 mM的DTT。
3. 本產(chǎn)品不抑制RNase H活性及逆轉(zhuǎn)錄酶活性。
運輸及保存方法
-20℃可保存12個月。
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