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直擴(kuò)型Taq DNA聚合酶(dNTP)說(shuō)明書

更新時(shí)間:2024-07-30      點(diǎn)擊次數(shù):815

直擴(kuò)型Taq DNA聚合酶(dNTP)說(shuō)明書

上海起發(fā)生物科技有限公司(Shanghai BioHub Biotechnology Co., Ltd.)屬于上海起發(fā)實(shí)驗(yàn)試劑有限公司(2009年成立)旗下的子公司,成立的初衷是建立上海起發(fā)生物自有品牌,打造優(yōu)質(zhì)的生物試劑民族自有品牌。降低成本的同時(shí),把好生物產(chǎn)業(yè)鏈中的國(guó)產(chǎn)生物試劑品質(zhì)關(guān)。未來(lái)讓每一個(gè)和我們一樣擁有民族情懷的企業(yè),共同創(chuàng)世界優(yōu)秀的中國(guó)生物制造企業(yè),圓夢(mèng)中國(guó)。

產(chǎn)品詳情

貨號(hào)

規(guī)格

78DC10012-500U

500U

78DC10012-500U×5

500U×5

78DC10012-2500U×4

2500U×4

78DC10012-2500U×10

2500U×10

產(chǎn)品詳情

Taq-D DNA聚合酶(KlenTaq),是大腸桿菌重組表達(dá)的嗜熱細(xì)菌Thermus aquaticus來(lái)源的外切酶缺失型Taq DNA聚合酶(刪除了5’ 外切酶結(jié)構(gòu)域)。該酶具有5’→3’聚合酶活性,無(wú)5’→3’外切酶活性和3’→5’外切酶活性。擴(kuò)增產(chǎn)物具有3'-dA尾巴。不可用于Taqman探針?lè)╭-PCR。本酶經(jīng)基因工程改造,尤其適合于溶解曲線法單核苷酸多態(tài)性(SNP)分型。擴(kuò)增片段的長(zhǎng)度可達(dá)3 kb。延伸速度為1.0 kb/ min(72℃)。

特點(diǎn)

· 無(wú)外切酶活性,適合于溶解曲線法單核苷酸多態(tài)性(SNP)分型;

· 熱穩(wěn)定性好:95℃下半衰期超過(guò)40 min;

· 可以摻入dUTP、dITP、熒光標(biāo)記核苷酸;

· 相比普通Taq DNA 聚合酶,本酶更加適合未處理的血液、組織、唾液等樣本的PCR。

濃度

2.5U/μl

活性定義

以大馬哈魚精子DNA作為模板/引物,在72℃、30 min內(nèi),將10 nmol脫氧核糖核苷酸摻入到酸不溶物中所需的酶量,定義為一個(gè)活性單位(U)。

酶貯存緩沖液

20 mM Tris-HCl (pH 8.0), 100 mM KCl, 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 0.5% Nonidet P40, 0.5% Tween 20, and 50% glycerol。

產(chǎn)品包裝規(guī)格及組成

Component

78DC10012--500u

78DC10012--2500u

78DC10012--10000u

78DC10011--25000U

Taq-D DNA聚合酶

KlenTaq

500U

500U×5

2500U×4

2500U×10

10×Taq-D Buffer

1.0 ml×1

1.0 ml×5

5.0 ml×4

5.0 ml×10

2 mM dNTPs

1.0 ml×1

1.0 ml×5

5.0 ml×4

5.0 ml×10

運(yùn)輸與保存

-20℃保存 冰袋運(yùn)輸

適用范圍

· 溶解曲線法基因分型/SNP測(cè)定;

· 菌落PCR;

· TA克隆PCR產(chǎn)物添加3’-dA;

· DNA熒光標(biāo)記;

· 血液、組織樣本等直擴(kuò)PCR。

應(yīng)用舉例

以下反應(yīng)舉例為50 μl標(biāo)準(zhǔn)PCR體系, 僅供參考。實(shí)際PCR條件應(yīng)根據(jù)模板、引物、目的片段大小加以優(yōu)化,確定最佳反應(yīng)條件。

組份

體積/μl

終濃度

10×Taq-D Buffer

5

dNTPs(2.0 mM)

5

0.2 mM

引物F(10 μM)

1.5

0.3 μM

引物R(10 μM)

1.5

0.3 μM

Template

Varable*

/

Taq-D(2.5U/μl)

1.0

2.5U

ddH2O

Varable

/

總體積

50

/

*DNA template可參照如下標(biāo)準(zhǔn)(50 μl PCR體系):

l 人類基因組DNA

0.1 μg-1 μg

l λDNA

0.5 ng-5 ng

l 質(zhì)粒DNA

0.01 ng-1 ng

l 大腸桿菌DNA

10 ng-100 ng

PCR反應(yīng)條件

95℃

5 min


95℃

15 sec


55~72℃

20 sec

30 Cycles

72℃

1-2 kb/min


72℃

5 min


注意事項(xiàng)

· 不可用于Taqman探針?lè)╭-PCR。

· 堿基出錯(cuò)率是指在每個(gè)堿基合成過(guò)程中所摻入的錯(cuò)誤核苷酸數(shù)目。Taq-D DNA聚合酶的堿基錯(cuò)誤率為1×10-5。

· 建議在冰上配置PCR 反應(yīng)液后,再放入PCR儀中進(jìn)行擴(kuò)增。這有利于提高擴(kuò)增的特異性,減少非特異性擴(kuò)增,得到良好的PCR結(jié)果。

· 如進(jìn)行PCR擴(kuò)增后,除目的條帶外,還伴隨其他雜帶,建議適當(dāng)減少體系中的酶用量,以增加PCR擴(kuò)增反應(yīng)的特異性。

· 本公司Buffer經(jīng)大量PCR反應(yīng)實(shí)例優(yōu)化而成,然而對(duì)某些PCR反應(yīng)存在一個(gè)鎂離子濃度。若需要優(yōu)化鎂離子濃度,請(qǐng)購(gòu)買本公司不含鎂離子的buffer和MgCl2/MgSO4。

· 本產(chǎn)品僅限科研實(shí)驗(yàn)使用,臨床應(yīng)用安全性和有效性未鑒定,不可用于醫(yī)療臨床診斷。

質(zhì)量控制

相關(guān)測(cè)試表明無(wú)外源內(nèi)切酶或外切脫氧核糖核酸酶污染。PCR方法檢測(cè)無(wú)宿主殘余DNA,能有效擴(kuò)增人基因組中的單拷貝基因。

室溫放置一周,擴(kuò)增活性無(wú)明顯改變;但強(qiáng)烈建議不要在室溫下長(zhǎng)期放置,用畢放回-20度。



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