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熱啟動(dòng)直擴(kuò)型Taq DNA聚合酶(dNTP)說明書

更新時(shí)間:2024-07-30      點(diǎn)擊次數(shù):436

熱啟動(dòng)直擴(kuò)型Taq DNA聚合酶(dNTP)說明書

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產(chǎn)品詳情

貨號(hào)

規(guī)格

78DC10014-250U

250U

78DC10014-250U×5

250U×5

78DC10014-1250U×4

1250U×4

78DC10014-2500U×5

2500U×5

產(chǎn)品詳情

本酶為Taq-D DNA聚合酶KlenTaq1)的熱啟動(dòng)型,需95度加熱5分鐘或98度加熱2分鐘而激活Taq-D DNA聚合酶是大腸桿菌重組表達(dá)的嗜熱細(xì)菌Thermus aquaticus來源的外切酶缺失型Taq DNA聚合酶(刪除了5’ 外切酶結(jié)構(gòu)域)。該酶具有5’→3’聚合酶活性,無5’→3’外切酶活性和3’→5’外切酶活性。擴(kuò)增產(chǎn)物具有3'-dA尾巴。不可用于Taqman探針法q-PCR。本酶經(jīng)基因工程改造,尤其適合于溶解曲線法單核苷酸多態(tài)性(SNP)分型。擴(kuò)增片段的長(zhǎng)度可達(dá)3 kb。延伸速度為1.0 kb/min(72℃)。

特點(diǎn)

· 本酶為熱啟動(dòng)聚合酶,可提高擴(kuò)增的特異性,減少非特異性擴(kuò)增和引物二聚體;

· 熱穩(wěn)定性好:95℃下半衰期超過40 min;

· 模板DNA耐受范圍廣;

· PCR產(chǎn)物具有3’-dA尾巴,可直接用于T/A克??;

· 可以摻入dUTP、dITP、熒光標(biāo)記核苷酸。

· 相比普通Taq DNA 聚合酶,本酶更加適合未處理的血液、組織、唾液等樣本的PCR;

濃度

2.5U/μl

活性定義

以大馬哈魚精子DNA作為模板/引物,在72℃、30 min內(nèi),將10 nmole脫氧核糖核苷酸摻入到酸不溶物中所需的酶量,定義為一個(gè)活性單位(U)。

酶貯存緩沖液

20 mM Tris-HCl (pH 8.0), 100 mM KCl, 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 0.5% Nonidet P40, 0.5% Tween 20, and 50% glycerol。

產(chǎn)品包裝規(guī)格及組成

Component

78DC10013-250u

78DC10013-250U×5

78DC10013-1250U×4

78DC10013-2500U×5

HS Taq-D DNA polymeraseKlenTaq1 dNTP)

250U

250U×5

1250U×4

2500U×5

10×Taq-D Buffer

0.5 ml×1

0.5 ml×5

1.0 ml×10

1.0 ml×25

2 mM dNTPs

0.5 ml×1

0.5 ml×5

1.0 ml×10

1.0 ml×25

運(yùn)輸與保存

-20℃保存 冰袋運(yùn)輸

適用范圍

·      溶解曲線法單核苷酸多態(tài)性(SNP)分型

·      DNA熒光標(biāo)記

·      血液、組織樣本等直擴(kuò)PCR

應(yīng)用舉例

以下反應(yīng)舉例為50 μl標(biāo)準(zhǔn)PCR體系, 僅供參考。實(shí)際PCR條件應(yīng)根據(jù)模板、引物、目的片段大小加以優(yōu)化,確定最佳反應(yīng)條件。

組份

體積/μl

終濃度

10×Taq-D Buffer

5

dNTPs(2.0 mM)

5

0.2 mM

引物F(10 μM)

1.5

0.3 μM

引物R(10 μM)

1.5

0.3 μM

Template

Varable*

/

HS Taq-D(2.5U/μl)

1.0

2.5U

ddH2O

Varable

/

總體積

50

/

     *DNA template可參照如下標(biāo)準(zhǔn)(50 μl PCR體系):

人類基因組DNA

0.1 μg-1 μg

λDNA

0.5 ng-5 ng

質(zhì)粒DNA

0.01 ng-1 ng

大腸桿菌DNA

10 ng-100 ng

  PCR反應(yīng)條件

95℃

5 min


95℃

15 sec


55~72℃

20 sec

30 Cycles

72℃

1 min/kb


72℃

5 min


注意事項(xiàng)

·      本酶為熱啟動(dòng)聚合酶,需95度加熱5分鐘或98度加熱2分鐘而激活;因此有利于提高擴(kuò)增的特異性,減少非特異性擴(kuò)增和引物二聚體,得到良好的PCR結(jié)果。

·      Taq-D DNA聚合酶具有脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶活性,因此在PCR產(chǎn)物3’末端通常會(huì)加上1個(gè)多余的腺嘌呤。

· 堿基出錯(cuò)率是指在每個(gè)堿基合成過程中所摻入的錯(cuò)誤核苷酸數(shù)目。Taq-D DNA聚合酶的堿基錯(cuò)誤率為1×10-5。

· 對(duì)非熱啟動(dòng)酶而言,建議在冰上配置PCR 反應(yīng)液后,再放入PCR儀中進(jìn)行擴(kuò)增。這有利于提高擴(kuò)增的特異性,減少非特異性擴(kuò)增,得到良好的PCR結(jié)果。

· 如進(jìn)行PCR擴(kuò)增后,除目的條帶外,還伴隨其他雜帶,建議適當(dāng)減少體系中的酶用量,以增加PCR擴(kuò)增反應(yīng)的特異性

· 本公司Buffer經(jīng)大量PCR反應(yīng)實(shí)例優(yōu)化而成,然而對(duì)某些PCR反應(yīng)存在一個(gè)鎂離子濃度。若需要優(yōu)化鎂離子濃度,請(qǐng)購(gòu)買本公司不含鎂離子的buffer和MgCl2/MgSO4。

     本產(chǎn)品僅限科研實(shí)驗(yàn)使用,臨床應(yīng)用安全性和有效性未鑒定,不可用于醫(yī)療臨床診斷。

質(zhì)量控制

相關(guān)測(cè)試表明無外源內(nèi)切酶或外切脫氧核糖核酸酶污染。PCR方法檢測(cè)無宿主殘余DNA,能有效擴(kuò)增人基因組中的單拷貝基因。

室溫放置一周,擴(kuò)增活性無明顯改變;但強(qiáng)烈建議不要在室溫下長(zhǎng)期放置,用畢放回-20度。



上海起發(fā)實(shí)驗(yàn)試劑有限公司
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