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高保真?高效率?高速PCR酶
KOD -Plus- Neo
用途
PCR
說明
KOD -Plus- Neo在高保真性PCR酶KOD -Plus-系列技術(shù)的基礎(chǔ)上,應(yīng)用了本公司新開發(fā)的「延伸增強(qiáng)劑」,保持了KOD -Plus-系列高保真性(約為Taq的80倍)的同時(shí),通過抑制<停滯現(xiàn)象>,明顯提高了對(duì)微量模板DNA、長(zhǎng)目的片段的擴(kuò)增效率。 |
特征
●可對(duì)微量模板DNA進(jìn)行高保真?高效率的擴(kuò)增
通過應(yīng)用延伸增強(qiáng)劑技術(shù),即便是微量模板DNA也可對(duì)目的基因進(jìn)行高保真?高效率的擴(kuò)增。同時(shí)本酶具備高保真性(約為Taq的80倍),可準(zhǔn)確地對(duì)低拷貝數(shù)模板的目的基因進(jìn)行擴(kuò)增。
※PCR錯(cuò)配率是通過使用各種酶以人基因組DNA為模板擴(kuò)增β-globin基因(2.4kb),對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行TA克隆后,對(duì)96個(gè)克隆進(jìn)行測(cè)序分析,測(cè)得的結(jié)果。
●縮短了延伸時(shí)間<30sec./kb>(長(zhǎng)目的片段更方便)
延伸時(shí)間從原產(chǎn)品的60sec./kb縮短到30sec./kb。對(duì)長(zhǎng)目的片段的擴(kuò)增更加方便。
●實(shí)現(xiàn)了各種引物同一循環(huán)條件
20mer以上的引物(Tm值>63℃)可先嘗試2步法。循環(huán)條件無需探討非常簡(jiǎn)便。(請(qǐng)參考基本反應(yīng)條件)
*Tm值采用最鄰近法(Nearest Neighbor method)計(jì)算得到的值。
●長(zhǎng)目的片段的擴(kuò)增
提高了延伸性,可對(duì)各種長(zhǎng)度的目的片段進(jìn)行擴(kuò)增。已通過實(shí)驗(yàn)確認(rèn)可對(duì)24kb的基因組DNA進(jìn)行擴(kuò)增。
●采用熱啟動(dòng)法,提高了PCR性能
原理
KOD DNA polymerase具有強(qiáng)有力的3’→5’核酸外切酶活性(校正活性),可準(zhǔn)確地對(duì)目的片段進(jìn)行擴(kuò)增,作為克隆用PCR酶獲得了廣泛的好評(píng)。 然而,高保真性PCR酶在20?30循環(huán)以后,容易出現(xiàn)擴(kuò)增無法持續(xù)的<停滯現(xiàn)象>。
KOD -Plus- Neo在高保真性PCR酶:KOD -Plus-系列技術(shù)的基礎(chǔ)上,應(yīng)用了本公司新開發(fā)的「延伸增強(qiáng)劑」,保持了KOD -Plus-系列高保真性(約為Taq的80倍)的同時(shí),通過抑制<停滯現(xiàn)象>,明顯提高了對(duì)微量模板DNA、長(zhǎng)目的片段的擴(kuò)增效率。 |
實(shí)驗(yàn)例
1. Total RNA的各種基因全長(zhǎng)ORF的擴(kuò)增
以HeLa細(xì)胞來源的Total RNA逆轉(zhuǎn)錄后得到的cDNA(Total RNA 50 ng相當(dāng))為模板, 對(duì)各種蛋白激酶的ORF(open reading frame)的全長(zhǎng)擴(kuò)增。反應(yīng)根據(jù)各PCR酶的推薦條件進(jìn)行了30個(gè)循環(huán)。結(jié)果可見,只有用KOD -Plus- Neo的情況下,所有的基因都能得到明亮的擴(kuò)增產(chǎn)物,所有的ORF都能迅速地進(jìn)行克隆。
2. β-globin基因上各種長(zhǎng)度區(qū)域的擴(kuò)增效率?延伸性的比較
以人基因組DNA(50ng)為模板,對(duì)各種長(zhǎng)度的β -globin 基因進(jìn)行擴(kuò)增。反應(yīng)按各PCR 酶的推薦條件,進(jìn)行了30個(gè)循環(huán)。結(jié)果顯示,只有用KOD -Plus- Neo 的情況下,17.5 kb 的片段能確認(rèn)得到明亮的條帶。 而且,17.5 kb 以下的片段,用KOD -Plus- Neo 的得率要高得多。
參考文獻(xiàn)
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