上海起發(fā)生物科技有限公司（Shanghai BioHub Biotechnology Co., Ltd.）屬于上海起發(fā)實(shí)驗(yàn)試劑有限公司（2009年成立）旗下的子公司，成立的初衷是建立上海起發(fā)生物自有品牌，打造國(guó)內(nèi)z大，z全面，優(yōu)質(zhì)的生物試劑民族自有品牌。降低成本的同時(shí)，把好生物產(chǎn)業(yè)鏈中的國(guó)產(chǎn)生物試劑品質(zhì)關(guān)。經(jīng)過(guò)近十余年的發(fā)展，公司逐漸形成了以生物醫(yī)藥研發(fā)，CRO，臨床診斷試劑產(chǎn)業(yè)為中心同時(shí)跨及農(nóng)業(yè)，環(huán)保、化工，電子等多維度領(lǐng)域的生物試劑及相關(guān)原料供應(yīng)商。產(chǎn)品涵蓋生化，蛋白質(zhì)，分子生物學(xué)，細(xì)胞，動(dòng)物，化工等諸多領(lǐng)域。

Biohub熱賣產(chǎn)品：

一、線性聚乙烯亞胺PEI MW40000

產(chǎn)品描述

BIOHUB 線性聚乙烯亞胺PEI MW40000 轉(zhuǎn)染試劑系列是基于聚乙烯亞胺（Polyethylenimine，PEI）的產(chǎn)品，因其較高的轉(zhuǎn)染效果，已廣泛應(yīng)用于AAV，LV和重組蛋白等工業(yè)化生產(chǎn)。

聚乙烯亞胺是一種具有較高陽(yáng)離子電荷密度的有機(jī)大分子，每相隔兩個(gè)碳原子，即每第三個(gè)原子都是質(zhì)子化的氨基氮原子，使得聚合物網(wǎng)絡(luò)在任何pH下都能充當(dāng)有效的“質(zhì)子海綿"體(proton sponge)，因此，非常容易結(jié)合帶負(fù)電荷的核酸分子，形成帶正電荷的復(fù)合物顆粒，該顆粒與細(xì)胞表面陰離子結(jié)合，很容易通過(guò)內(nèi)吞作用進(jìn)入細(xì)胞；并且可抵御溶酶體的降解作用，從而提高核酸分子的表達(dá)水平。

基本信息

CAS

49553-93-7

分子式

(C2H5N)n . xHCl

分子量

40,000 (~22,000 free base)

熔點(diǎn)

73-75℃

溶解性

溶于冷水

不溶于

常用有機(jī)溶劑（乙醇、丙酮、四氫呋喃）

形式

白色固體粉末

生物毒性

未知

安全防護(hù)

手套，護(hù)目鏡，口罩

存儲(chǔ)

粉末至少可以保存一年， PEI內(nèi)含自由氨基，建議開封后4℃干燥保存，減緩氧化過(guò)程。

運(yùn)輸

常溫運(yùn)輸

特點(diǎn)

大量實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)反饋，細(xì)胞通用性好，有非常好的轉(zhuǎn)染效果，尤其對(duì)293，CHO細(xì)胞系有特別顯著的轉(zhuǎn)染效果。

配置方法

PEI 轉(zhuǎn)染試劑粉末配置方法：

將 1g PEI MW40000 放入盛有 900 mL 水的玻璃燒杯中

放入攪拌轉(zhuǎn)子，放置于磁力攪拌器上，設(shè)置攪拌程序以形成一個(gè)較小的漩渦

等待 PEI MW40000 完q溶解，通常需要 5 分鐘左右

用 25 mL 塑料移液管加入 1 N NaOH 滴定至 pH 6.9~7.1

如果不小心超過(guò) 7.1，則使用 1N 的鹽酸和新的塑料移液管將 pH 重新滴定至 6.9~7.1

將溶液轉(zhuǎn)移到 1L 玻璃量筒中，加入水定容至 1L

用無(wú)菌真空過(guò)濾膜過(guò)濾配制的轉(zhuǎn)染試劑溶液

按需分裝，4°C 儲(chǔ)存

配置成液體后分裝在合適的瓶子中，并且保存在 4℃ 的轉(zhuǎn)染試劑將可在 6 個(gè)月之內(nèi)保持性能。

如僅用于蛋白定性研究，分裝的轉(zhuǎn)染試劑可延長(zhǎng)有效使用期至 1 年。

轉(zhuǎn)染操作流程：(貼壁細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法)

1. 接種細(xì)胞： 轉(zhuǎn)染前一天，用膠原酶（BIOHUB Cat#78CL10002)消化細(xì)胞并計(jì)數(shù)（不建議用胰酶）。將細(xì)胞鋪入細(xì)胞培養(yǎng)的器皿，每個(gè)孔加入的細(xì)胞量參考下圖表1，一般18-24小時(shí)（sf9細(xì)胞為3-4小時(shí)）后轉(zhuǎn)染。轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞匯合度應(yīng)至少達(dá)到 70~80%以上。轉(zhuǎn)染前更換為含5%血清的生長(zhǎng)培養(yǎng)基。

2. 準(zhǔn)備 DNA-PEI 復(fù)合物： DNA、PEI 試劑和稀釋劑在進(jìn)行以下步驟前需先使其升至室溫。用 Opti-MEM ITM或其他適合的無(wú)血清培養(yǎng)基稀釋適量 DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋 PEI 試劑。每 1 μg DNA 需用 1-5 μL 線性PEI轉(zhuǎn)染試劑。一邊輕輕渦旋裝有 DNA 溶液的試管，一邊將稀釋的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑滴加至試管中（注意：請(qǐng)勿顛倒添加順序）。充分混勻后，室溫靜置 10~25 min 以形成 DNA-PEI復(fù)合物。當(dāng)溶液體積較大時(shí)，請(qǐng)用圓底聚丙烯管，例如 NEST 5 mL /14 mL 離心管。 （稀釋PEI和DNA的體積為培養(yǎng)體積的1/10-1/20, DNA濃度為1ug/ml）

3. 轉(zhuǎn)染細(xì)胞： 直接向每個(gè)孔中加入 DNA-PEI復(fù)合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿。轉(zhuǎn)染4-6小時(shí)（sf9細(xì)胞為2小時(shí) )后，更換為生長(zhǎng)培養(yǎng)基。

4. 孵育細(xì)胞和分析結(jié)果： 在 CO2培養(yǎng)箱中 37℃下孵育細(xì)胞至可以分析檢測(cè)。轉(zhuǎn)染后最快 7 h 即可檢測(cè)到轉(zhuǎn)入基因的表達(dá)。 請(qǐng)自行確定z適合檢測(cè)時(shí)間。

5. 轉(zhuǎn)染 24 h 后，將細(xì)胞傳代至新鮮的生長(zhǎng)培養(yǎng)基中（將細(xì)胞稀釋 10 倍 以上），在 CO2培養(yǎng)箱中 37℃孵育過(guò)夜。第二天加入與轉(zhuǎn)染抗性基因相匹配的篩選藥物。約 1~2 周可 篩選到耐藥性克隆，在這期間需經(jīng)常更換含篩選藥物的生長(zhǎng)培養(yǎng)基。

轉(zhuǎn)染操作流程：(懸浮細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法)

1. 轉(zhuǎn)染前準(zhǔn)備：懸浮細(xì)胞傳代接種于適量含懸浮細(xì)胞生長(zhǎng)培養(yǎng)基中，合適條件下培養(yǎng)。根據(jù)培養(yǎng)瓶大小調(diào)整細(xì)胞密度（例100mL培養(yǎng)瓶，1X10 6 cells/mL），然后旋緊瓶口放入搖床繼續(xù)培養(yǎng)，2~4小時(shí)后可以進(jìn)行轉(zhuǎn)染。

2. 準(zhǔn)備 DNA-PEI 復(fù)合物：DNA、PEI 試劑和稀釋劑在進(jìn)行以下步驟前需先使其升至室。用 Opti-MEM ITM或其他適合的無(wú)血清培養(yǎng)基稀釋適量 DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋 PEI 試劑。每 1 μg DNA 需用 1-5 μL 線性PEI轉(zhuǎn)染試劑。一邊輕輕渦旋裝有 DNA 溶液的試管，一邊將稀釋的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑滴加至試管中（注意：請(qǐng)勿顛倒添加順序）。充分混勻后，室溫靜置 10~25 min 以形成 DNA-PEI復(fù)合物。當(dāng)溶液體積較大時(shí)，請(qǐng)用圓底聚丙烯管，例如 NEST 5 mL /14 mL 離心管。

3. 轉(zhuǎn)染細(xì)胞：將PEI-DNA轉(zhuǎn)染復(fù)合物逐滴加入到細(xì)胞培養(yǎng)液中，搖勻后旋緊瓶口放回?fù)u床合適培養(yǎng)條件下培養(yǎng)至可以分析檢測(cè)。

4. 孵育細(xì)胞和分析結(jié)果：轉(zhuǎn)染后一般24-72h即可檢測(cè)到轉(zhuǎn)入基因的表達(dá)。 請(qǐng)自行確定z適合檢測(cè)時(shí)間。

5. 如果要獲得更多的蛋白產(chǎn)量，有文獻(xiàn)表明轉(zhuǎn)染后24小時(shí)，可以適當(dāng)稀釋細(xì)胞，稀釋比例參考范圍（1:2—1:5）之間，可以增加蛋白產(chǎn)量，稀釋效應(yīng)與最佳稀釋比率應(yīng)根據(jù)經(jīng)驗(yàn)確定。

產(chǎn)品背景

BIOHUB 生產(chǎn)的78Bio PEI是一種優(yōu)化的線性陽(yáng)離子聚合物轉(zhuǎn)染試劑,分子量分別為 25000 和 40000，78BioPEI40000 相比 25000 轉(zhuǎn)染效率高，但毒性也略大于 78PIE25000。在 HEK293 和 CHO 的蛋白表達(dá)系統(tǒng)中，相比于市面上的脂質(zhì)體 78BioPEI 都表現(xiàn)出高的蛋白表達(dá)量（無(wú) 論是 96 孔板還是 100L 的細(xì)胞反應(yīng)器），以及更小的細(xì)胞毒性、更高的轉(zhuǎn)染效和更高的可 重復(fù)性，并且十分經(jīng)濟(jì)的高性價(jià)比轉(zhuǎn)染試劑。產(chǎn)品具有以下特點(diǎn)：

1.轉(zhuǎn)染效率高，細(xì)胞毒性低；  蛋白表達(dá)量高；

2.節(jié)約成本：BIOHUB 78 PEI轉(zhuǎn)染試劑 ，進(jìn)口品質(zhì)，親民價(jià)格，至少能夠降 40% 的轉(zhuǎn)染試劑總成本；

3.適用于 HEK293 等真核細(xì)胞的轉(zhuǎn)染；

4.適用于貼壁細(xì)胞和懸浮細(xì)胞的轉(zhuǎn)染；

5.適用于有血清和無(wú)血清的轉(zhuǎn)染條件；

6. 無(wú)機(jī)試劑，無(wú)動(dòng)物源成分；

7. 產(chǎn)品穩(wěn)定，質(zhì)控嚴(yán)格；

8. 工藝流程適用范圍廣，容易優(yōu)化 適合小規(guī)模培養(yǎng)板，培養(yǎng)瓶到大規(guī)模的生物反應(yīng)器。

產(chǎn)品反饋

注意事項(xiàng)

1. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

2. 本產(chǎn)品主要用于科研領(lǐng)域，不宜用于臨床診斷或其他用途。

3.加熱或加酸都有助于 78BioPEI 溶解。當(dāng)然酸可能不用加那么多，詳細(xì)用量可試加一點(diǎn) ,攪拌看看，足夠溶解就行，不一定需要加到 pH 那么低。

4.一定要溶解充分，溶解不充分會(huì)影響后續(xù)的轉(zhuǎn)染效率.

5.冷凍后可能會(huì)影響其后續(xù)轉(zhuǎn)染效果。

特別提醒：初次使用 78PEI 進(jìn)行不同基因轉(zhuǎn)染時(shí)應(yīng)先做預(yù)試，優(yōu)化出適合自己實(shí)驗(yàn)的， 最佳 PEI 和 DNA 的比例，通常篩選范圍在 1:1 到 5:1 之間，如果之前用過(guò)Polysciences品牌的 PEI，用 78BioPEI 時(shí)應(yīng)適當(dāng)降低使用濃度。

二、蛋白快速染色液

簡(jiǎn)介

一種特殊配方的考馬斯亮藍(lán)染液，只染蛋白不染膠。無(wú)刺激性氣味高度環(huán)保，可用于ＳＤＳ-ＰＡＧＥ或非變性ＰＡＧＥ等蛋白電泳膠的快速、高靈敏染色，或Western轉(zhuǎn)膜后PAGE膠上殘余蛋白的檢測(cè)。對(duì)于 1.0 mm 厚度的凝膠，染色過(guò)程僅需15分鐘，就可以檢測(cè)到低達(dá)20ng的蛋白電泳條帶，若實(shí)驗(yàn)對(duì)檢測(cè)靈敏度有較高要求，可將凝膠放置在染色液中2小時(shí)，可達(dá)到最大靈敏度(BSA：7ng)。

l 無(wú)需固定，微波或脫色，最快10min可觀測(cè)到蛋白條帶

l 高靈敏度 檢測(cè)下限可達(dá)7ng

l 背景清晰 過(guò)夜也不會(huì)染色過(guò)度

l 經(jīng)濟(jì)安全 每塊膠僅需25ml染色液

l 質(zhì)譜兼容 不會(huì)使蛋白甲基化或乙?；?/p>

推薦用法

1. 電泳后的SDS-PAGE 膠取下放入容器中，加入25 ml本染色液（適用于8cm*8cm*1.5mm SDS-PAGE凝膠，按實(shí)際大小酌情增減，調(diào)整范圍30-50ml）。

2. 置于搖床上搖動(dòng)，2-5min 后條帶開始顯現(xiàn)，1h后可見(jiàn)背景清晰細(xì)小條帶，染色時(shí)間可根據(jù)膠類型和檢測(cè)蛋白調(diào)整（40min -過(guò)夜）均可。背景顏色基本不會(huì)隨染色時(shí)間增強(qiáng)。

3. 染色結(jié)束后，將蛋白凝膠至于水中保存及取出拍照。因蛋白等電點(diǎn)不同，染料瞬時(shí)附著能力不同，建議染色 2h 以后，或者過(guò)夜，再將凝膠放入水中效果更佳。

4. 染液可以重復(fù)利用 2-3 次。隨使用次數(shù)的增加，需增加染色時(shí)間。

基本參數(shù)

常見(jiàn)問(wèn)題

注意事項(xiàng)

1. 染色液放置一段時(shí)間瓶底會(huì)有沉淀，使用之前請(qǐng)上下顛倒混勻。

2. 本染色液呈酸性，有輕微腐蝕性，使用時(shí)請(qǐng)作必要防護(hù)。

3. 需自備去離子水或雙蒸水。

4. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

5. 本產(chǎn)品主要用于科研領(lǐng)域，不宜用于臨床診斷或其他用途。

三、優(yōu)級(jí)胎牛血清 Fetal Bovine Serum（FBS, Superfine）

產(chǎn)品描述

胎牛血清(優(yōu)級(jí))具有j格優(yōu)惠、性價(jià)比高的特點(diǎn)，來(lái)源清晰。適用于多種細(xì)胞的培養(yǎng)，如大多數(shù)動(dòng)物器官細(xì)胞的培養(yǎng)，腫瘤細(xì)胞和癌細(xì)胞的培養(yǎng)，以及部分融合細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)和培養(yǎng)。它還可用于細(xì)胞系的保存和組織器官的培養(yǎng)、單克隆抗體的研制、絕大多數(shù)腫瘤細(xì)胞的培養(yǎng)，也可用于少數(shù)干細(xì)胞的培養(yǎng)，如脂肪干細(xì)胞。由于其自身的特點(diǎn)，該產(chǎn)品已成為公司銷量z大的產(chǎn)品。此材料來(lái)源于美國(guó)農(nóng)業(yè)部認(rèn)證的原料，和我們其他等級(jí)的原料一樣經(jīng)過(guò)同樣的過(guò)濾方案和最終的質(zhì)量控制測(cè)試。這種胎牛血清通過(guò)100nm (0.1 mm)孔徑分級(jí)過(guò)濾器進(jìn)行過(guò)濾。在分裝之前，每批血清使用真池技術(shù)進(jìn)行混合，以確保各瓶之間的均勻性和一致性。

產(chǎn)品特點(diǎn)

低內(nèi)毒素，無(wú)細(xì)菌，支原體，噬菌體，病毒等污染;

無(wú)外源添加因子，不含技術(shù)，抗生素等；

產(chǎn)品應(yīng)用

已通過(guò)本公司300多種細(xì)胞株和上百種原代細(xì)胞的驗(yàn)證，細(xì)胞生長(zhǎng)速度快，狀態(tài)良好。

運(yùn)輸與保存方法

干冰運(yùn)輸，-20°C凍存。

注意事項(xiàng)

請(qǐng)?jiān)?°C-8°C的環(huán)境中解凍，不宜在較高溫度下進(jìn)行解凍；注意：解凍溫度較高會(huì)導(dǎo)致血清渾濁，沉淀增加，品質(zhì)下降，

血清解凍過(guò)程中請(qǐng)不時(shí)搖勻（小心勿造成氣泡），使血清成分和溫度均勻，從而減少沉淀的產(chǎn)生。

血清解凍后應(yīng)盡快用完，盡量避免反復(fù)凍融。

血清不宜在是室溫中長(zhǎng)時(shí)間放置，使用后盡快放回2°C-8°C中。

高溫解凍，舉例搖晃，反復(fù)凍融，放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)等，請(qǐng)勿超過(guò)一個(gè)月。

四、ACCUTASE™ 細(xì)胞消化液

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

Accutase™是包含蛋白水解酶和膠原酶活性的一種細(xì)胞消化液，是胰酶/EDTA消化液的w美替換產(chǎn)品，用于從常規(guī)組織培養(yǎng)器皿和粘附培養(yǎng)器皿中消化細(xì)胞。適用于組織解離和細(xì)胞分離，因分離后的細(xì)胞能保持完好的表面抗原，且不含任何動(dòng)物動(dòng)物或者細(xì)菌來(lái)源組分，可滿足對(duì)后續(xù)如細(xì)胞表面標(biāo)記、病毒生長(zhǎng)分析、流式細(xì)胞分析以及生物反應(yīng)器相關(guān)檢測(cè)等多種實(shí)驗(yàn)的要求。

與傳統(tǒng)的胰酶消化液相比，本品具有以下優(yōu)勢(shì)：

1）適用于絕大多數(shù)原代細(xì)胞和哺乳動(dòng)物細(xì)胞系的消化，以及昆蟲細(xì)胞；

2）溫和有效的消化干細(xì)胞（hESCs和mESCs），凍存后細(xì)胞具更高復(fù)蘇率；

3）幾分鐘內(nèi)實(shí)現(xiàn)粘附細(xì)胞的分離，不需清洗或中和反應(yīng)，節(jié)省細(xì)胞傳代時(shí)間；

4）對(duì)細(xì)胞消化較為溫和，能增加細(xì)胞產(chǎn)量和存活率；增強(qiáng)細(xì)胞貼壁效率；改善細(xì)胞形態(tài)和細(xì)胞生長(zhǎng)特性等。

本品為即用型的無(wú)菌產(chǎn)品，溶于Dulbecco’s PBS（含0.5 mM EDTA和3 mg/L酚紅），酶活性≥ 200 U/mL，可直接用于細(xì)胞培養(yǎng)相關(guān)實(shí)驗(yàn)。使用說(shuō)明

1. 4 ℃或冰浴融解Accutase，之后進(jìn)行分裝保存。

【注】：不可37 ℃融化本品，否則會(huì)影響酶活。

2. 使用不含鈣、鎂的1×Dulbecco's PBS潤(rùn)洗細(xì)胞一次；

3. 以無(wú)菌操作的方式，按 75 cm2表面積加入10 mL的Accutase覆蓋貼壁細(xì)胞；

4. 重新放入37 ℃培養(yǎng)箱內(nèi)，消化5-10 min；

【注】：消化時(shí)間可自行調(diào)整。大部分細(xì)胞處于Accutase中高達(dá)1小時(shí)，對(duì)細(xì)胞狀態(tài)無(wú)影響。

5. 消化結(jié)束后，輕輕敲擊培養(yǎng)皿，使細(xì)胞與皿底部脫離，依照常規(guī)操作進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)和傳代。

【注】：不需另做清洗和酶活終止步驟。

保存條件

冰袋運(yùn)輸。收到后請(qǐng)于-20 ℃保存，有效期2年。2~8 ℃保存，有效期2個(gè)月。

注意事項(xiàng)

1. Accutase™融化后4℃保存，至少2個(gè)月穩(wěn)定。不可室溫保存。也可分裝成單次用量，放到-80 ℃凍存，有效期2年。

2. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

3. 本產(chǎn)品主要用于科研領(lǐng)域，不宜用于臨床診斷或其他用途。

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